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Application of Lab-Disk to high-throughput genomic profiling of single cells

Lab-Disk 在单细胞高通量基因组分析中的应用

基本信息

批准号：
21510127
负责人：
KUBO Izumi
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Soka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21510127/
关键词：
マイクロセンサーハイスループットラボディスク Jurkat Cell GAPDH Hot Cell Direct RT-PCR ナノリッターPCR 蛍光プローブ単一細胞分離マイクロチャンバー Hot Cell direct RT-PCR ディスク Double dye probe 単一細胞 RT-PCR m-RNA ナノリッター

项目摘要

We have developed a CD-shaped device(Lab-disk) to isolate single cell from a large number of cells simply and rapidly. In order to perform PCR or RT-PCR on the device, the device was fabricated from silicon and glass not to evaporate the entrapped solution in the microchambers in this study. Amplification of Salmonella specific invA gene form single cell was confirmed on the disk at 200 cells/μl of Salmonella enterica after single cell isolation and PCR. To realize q-PCR of Jurkat cell, hot cell-direct RT-PCR was enabled by using Tth DNA Polymerase, which is a thermo-stable polymerase and has high reverse transcription activity. After cell isolation and successive hot cell-direct RT-PCR on the device, fluorescent signals from RT-PCR products for single cells were detected at 200 cells/μl of Jurkat cell or less.

我们开发了一种CD形的装置（Lab-disk），用于从大量细胞中简单快速地分离单个细胞。为了在该装置上进行PCR或RT-PCR，该装置由硅和玻璃制成，在本研究中不会蒸发微室中的截留溶液。经单细胞分离和PCR扩增，以200个/μl的沙门氏菌为接种量，在纸片上检测到沙门氏菌特异性invA基因的扩增。为了实现Jurkat细胞的q-PCR，通过使用Tth DNA聚合酶实现热细胞直接RT-PCR，Tth DNA聚合酶是一种热稳定聚合酶并且具有高逆转录活性。在细胞分离和装置上的连续热细胞直接RT-PCR后，在200个细胞/μl Jurkat细胞或更少的条件下检测到来自单细胞RT-PCR产物的荧光信号。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

細胞活性評価用マイクロ流路ディスクでの細胞のトラップと評価

使用微通道盘捕获和评估细胞活性评估

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
久保いづみ;的場健二;古谷俊介
通讯作者：
古谷俊介

集積化したマイクロウェルアレイを用いる単離技術

使用集成微孔阵列的隔离技术

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Single Cell Separation and PCR on Compact Disk Shaped Microfluidic Device

光盘形微流控装置上的单细胞分离和 PCR

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
M.Saito;K.Koyama;Izumi KUBO
通讯作者：
Izumi KUBO

RT-PCR of isolated single cells on a Compact Disk (CD)-shaped device

在光盘 (CD) 形状的装置上对分离的单细胞进行 RT-PCR

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kikuta;Shin;菊田伸;菊田伸;菊田伸;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Izumi Kubo;古谷俊介;齋藤翼;新井一幸;小椋功太郎;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani
通讯作者：
Shunsuke Furutani

ハイスループットな単一細胞分離ディスク上での Jurkat cell の生細胞検出

高通量单细胞分离盘上 Jurkat 细胞的活细胞检测