Development of thermostable protein-refolding catalysis and characterization of the kinetic properties

热稳定性蛋白质重折叠催化的发展及其动力学特性的表征

• 批准号: 21580112
• 负责人: TAMURA Takashi
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21580112/
• 关键词: 酵素化学; ジスルフィド架橋; 蛋白質フォールディング; 酸化還元電位; 平衡論支配; 速度論支配; シグナルペプチド配列; ペリプラズム空間; ジスルフィドイソメラーゼ; ジスルフイド架橋; ジスルフィト架橋; シグナルペブチド配列; ペリープラズム空間

The present study assessed the contribution of sctive site sequence of Escherichia coli DsbA by screening a library of mutant dsbA genes with the genetically randomized active-site sequence CXXC. Alleles of 24 dsbA mutants gave significant variation in the cellular functions, and a mutant dsbA gene that encodes Cys-Asp-Ile-Cys sequence enhanced pahge sensitivity by 40-fold more than the wild-type dsbA. The redox potential of DsbA[CDIC] was determined to be. 171. 8 mV, which suggested less oxidizing catalyst than the wild type DsbA(-125. 9 mV) and the redox potential was close to that of yeast protein disulfide isomerase(175 mV). It was suggested that DsbA[CDIC] improved the net yield of the correctly folded periplasmic proteins through the disulfide isomerase catalysis. Thermostable homologs were also characterized for application of folding catalysis at high temperature.

本研究通过筛选具有遗传随机化活性位点序列CXXC的突变dsbA基因文库，评估了大肠杆菌DsbA的活性位点序列的贡献。24个dsbA突变体的等位基因在细胞功能上产生了显着的变化，并且编码Cys-Asp-Ile-Cys序列的突变dsbA基因比野生型dsbA提高了40倍以上的pahge敏感性。测定DsbA[CDIC]的氧化还原电位为。171. 8 mV，这表明比野生型DsbA（~ 125.氧化还原电位接近酵母蛋白二硫键异构酶的氧化还原电位（175 mV）。这表明DsbA[CDIC]通过二硫键异构酶催化提高了正确折叠的周质蛋白的净产量。热稳定同系物也被表征为在高温下折叠催化的应用。

项目成果

ジスルフィドイソメラーゼの酸化還元電位を持つDsbA[CRIC]の発現系検討

具有二硫键异构酶氧化还原电位的DsbA [CRIC]表达系统的检查

• 发表时间: 2010
• 作者: 清遠亜沙子;田村隆;吉田隆真;稲垣賢二
• 通讯作者: 稲垣賢二

ERストレスとセレンタンパク質Sep15

内质网应激和硒蛋白Sep15

• 发表时间: 2011
• 期刊: ビタミン
• 作者: T.Utsumi;J.Arima;C.Sakaguchi;T.Tamura;C.Sasaki;H.Kusakabe;S.Sugio;K.Inagakai;田村隆;田村隆;田村隆
• 通讯作者: 田村隆

セレン代謝の初期過程に関わる蛋白質群

参与硒代谢初始过程的一组蛋白质

• 发表时间: 2011
• 期刊: ビタミン
• 作者: T.Utsumi;J.Arima;C.Sakaguchi;T.Tamura;C.Sasaki;H.Kusakabe;S.Sugio;K.Inagakai;田村隆;田村隆;田村隆;田村隆
• 通讯作者: 田村隆

Identification of ornithine-lactam as a biosynthetic intermediate for sinefungin biosynthesis in Streptomyces incarnatus NRRL8089

鸟氨酸-内酰胺作为链霉菌 NRRL8089 辛芬净生物合成中间体的鉴定

• 发表时间: 2010
• 期刊: Actinomycetologica
• 作者: K. Fukuda;T. Tamura;K. Sato;K. Inagaki
• 通讯作者: K. Inagaki

水素で車が走る未来へ～新しいヒドロゲナーゼの発見～

迈向汽车以氢为动力的未来～新氢化酶的发现～

• 发表时间: 2011
• 期刊: 生物工学会誌
• 作者: T.Utsumi;J.Arima;C.Sakaguchi;T.Tamura;C.Sasaki;H.Kusakabe;S.Sugio;K.Inagakai;田村隆;田村隆
• 通讯作者: 田村隆