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抗菌ペプチドCATESTATINによる表皮角化細胞遊走誘導制御機構の解析

抗菌肽CATESTATIN诱导表皮角质形成细胞迁移的调控机制分析

基本信息

批准号：
21591465
负责人：
徳丸晶
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21591465/
关键词：
抗菌ペプチド catestatin 表皮角化細胞シグナル伝達

项目摘要

HB-EGFを介したEGF受容体Transactivation機構の関与の有無の検討Catestatinによる細胞遊走へのTransactivation機構が関与の有無を明らかにする目的で、同様に各段階の阻害剤(変換酵素阻害剤OSU8、遊離型HB-EGFに対する中和抗体CRM197、EGFRとHB-EGFの結合を阻害する抗EGFR中和抗体、EGFRキナーゼ活性阻害剤AG1478)を用いてBoyden Chamberによる解析を行ったところ、いずれの阻害剤添加においても細胞の遊走は阻害されなかった。当初の予想に反して、CatestatinによりEGF受容体は活性化されるが、Transactivation機構は関与していないことが明らかとなった。EGF受容体下流のシグナル伝達経路の検討そこで細胞遊走制御に重要な分子としてSmall GTPase、特にRacに注目し解析を行った。Catestatin刺激によるRacの活性化をKinase Assayにより評価したところEGFRの活性化に引き続き30分をピークとした活性化が認められた。cdc42の活性化は認めなかった。またRacの阻害剤添加により細胞遊走が完全に阻害された。下流のシグナルであるRho Kinaseも同様にRho阻害剤、その下流のRockもまた、Rock阻害剤添加により細胞遊走は完全に阻害され、遊走のシグナルはSmall GTPaseにより制御されていることが示唆された。最後にこれらSmall GTPaseの上流で活性を制御していると考えられるPI-3Kの解析を行った。PI-3Kの阻害剤添加により細胞遊走は完全に阻害された。以上の結果からCatestatinは表皮角化細胞の遊走を促進させ、その遊走機構にはEGF受容体を介した一連のPI3K-Rac-Rhoシグナル経路が中心的な役割を果たしていることが明らかとなった。

HB-EGF receptor Transactivation mechanism related to the presence or absence of Catestatin, cell migration, Transactivation mechanism related to the presence or absence of Catestatin, cell migration, Transactivation mechanism related to the presence or absence of Catestatin, cell migration, Transactivation mechanism related to the presence or absence of Catestatin, cell migration, cell migration, cell (Transforming enzyme inhibitor OSU8, neutralizing antibody CRM197 against free HB-EGF, neutralizing antibody against EGFR and HB-EGF binding inhibitor AG1478) The analysis of EGFR activity in Boyden Chamber was carried out in the presence of inhibitors added in the middle of cell migration inhibition. Contrary to expectations, it is now clear that the EGF receptor is activated in Catestatin and the Transactivation mechanism is involved. EGF receptor down-stream pathway analysis, cell migration control of important molecules, Small GTase, special Rac analysis Catestatin Stimulation: Activation of Rac by Kinase Assay cdc42 is activated. The addition of Rac inhibitors completely blocks cell migration. Rho Kinase is the same as Rho Inhibitor, Rock Inhibitor, Rock Inhibitor Addition, Cell Migration Complete Inhibitor, Migration Inhibitor, and Small GTase Inhibitor. Finally, the Small GTase upstream activity is controlled by PI-3K analysis. PI-3K inhibitors are added to completely inhibit cell migration. The above results show that the migration of epidermal keratinocytes is promoted, and the migration mechanism of epidermal keratinocytes is connected with PI3 K-Rho.