分子と「オミックス」生物学的アプローチによる、単一神経細胞種からみた脳の可塑性の研究

使用分子和组学生物学方法从单一神经元细胞类型的角度研究大脑可塑性

• 批准号: 09F09745
• 负责人: CARNINCI Piero
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09F09745/
• 关键词: 視覚野の可塑性; Rett Syndrome; MeCP2; Foxg1; ヒストンデアセチラーゼ阻害剤; シナプスの可塑性; sRNA seq; ChIP-sequencing; visual cortex plasticity; Histone deacetylase inhibitors; Impaired synaptic plasticity; nanoCAGE

本研究の主要な目的は、レット症候群にみられる重篤な症状の原因となっている異常を、ゲノムワイドに明らかにすることにある。具体的には、レット症候群関連遺伝子と考えられているmecp2遺伝子欠損マウスにおいて、可塑性に異常が認められた大脳視覚野のトランスクリプトームを正常マウスのそれと比較することと、MeCP2やFoxg1の標的と考えられるゲノム領域を特定することである。前者については、mecp2遺伝子欠損マウスを繁殖させることの難しさから、共同研究者からのサンプルの到着が遅れたものの、現在はすべてのサンプルがそろい、そこからヘリコスCAGEライブラリーを作製しているところである。これをシークエンスすることで、mecp2遺伝子欠損マウスがレット症候群を発症する前後のトランスクリプトームを比較する。後者に関しては、前年度に引き続き、ChiP-seq法を用いて、大脳視覚野におけるMeCP2やFoxg1の標的領域を調べた。ひとつのサンプル量が少量のため、ChiP-seqのプロトコールをそれに最適化する必要があり、時間がかかったが、最終的に900ヶ所以上のFoxg1ターゲットを特定できた。現在、これらのターゲット候補を定量PCRにて確認中である。その最終的な確認を待たなければならないが、Foxg1はゲノム中の繰り返し配列に結合する傾向を見出した。この少量のサンプルにChiP-seqを最適化したプロトコールは、現在投稿準備中である。さらに、共同研究としてFoxg1の発現量の確認を行い、その結果は現在投稿準備中である。これらに加えて、今期は共同研究としてsRNAライブラリーを作製し、sRNA依存的なDNAダメージ応答を明らかにした。

The main purpose of this study is to investigate the causes of severe symptoms and abnormal symptoms in patients with acute respiratory syndrome. The specific genes associated with the syndrome are examined in mecp2 gene deficiency, plasticity, abnormality, recognition of large visual field, and comparison with MeCP2 and Foxg1 gene targets. The former has been difficult to reproduce due to the lack of damage to the mecp2 gene, and the co-researcher has been able to find a solution. Now, the co-researcher has been able to make CAGE radio broadcasts. Comparison of mecp2 gene deficiency before and after the onset of the syndrome The latter is related to the previous year's introduction, Chip-seq method, and the use of MeCP2 and Foxg1 in the field of large vision. The amount of the service is small, the Chip-seq service is optimized, the time is short, the final 900 is short, so the Foxg1 service is specific. Now, the candidate is confirmed by quantitative PCR. The final confirmation is pending, and Fox1 has a tendency to combine with the final confirmation. A small amount of Chip-seq is optimized, and now submission preparation is underway. In addition, the joint research and verification of Foxg1 's discovery amount are in progress, and the results are now in preparation for submission. This year, we will jointly study the control of RNA and RNA dependent DNA.