Inhibition der Interferon-stimulierten Genexpression durch das Terminal-Protein (TP) der Hepadnaviren

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IFN-a inhibiert die Replikation des Hepatitis B Virus (HBV). Wir haben gefunden, daß die Expression des IFN-a stimulierten Gene (ISGs) durch die Polymerase des HBV und Woodchuck Hepatitis Virus (WHV) blockiert werden kann. Diese Inhibition betrifft spezifisch die ISRE-abhängige ISG Expression. Das virale Terminal-Protein (TP), ist dafür verantwortlich. Im ersten Teil dieses Projektes soll die Rolle des TPs für die virale Replikation aufgeklärt werden. Die funktionelle Region innerhalb des HBV und WHV TP soll genau kartiert werden. HBV Mutanten mit Veränderungen im TP werden hergestellt und ihre Replikationskompetenz und Sensitivität gegen IFN-a werden untersucht. Darüber hinaus sollen die molekularen Mechanismen, die zur Inhibition des ISG Expression durch HBV und WHV TP führen, aufgekärt werden. Humane und Woodchuck Zellen werden mit TP stabil transfiziert. Die Induktion der antiviralen Status und der ISG Expression durch IFN-a in TP-transfizierten Zellen werden untersucht. Die Expression der zellulären Proteine der Signaltransduktion wird bestimmt und ihre Interaktion mit dem TP analysiert. Die Bindung dieser Proteine an ISRE-Oligo-Nukleotide wird mittels Gel Shift-Assay untersucht. Schließlich wird diese Analyse auch an primären Woodchuck Hepatozyten durchgeführt. Wir erwarten Einsicht darüber, welche Schritte der IFN-a Signaltransduktion zur ISRE-abhängigen Geneexpression durch TP unterbrochen werden und welche Bedeutung die TP-vermittelte Inhibition gegen IFN-a für die HBV Replikation hat.