AGE(終末糖化産物)受容体阻害剤の探索及び相互作用解析

我々は終末糖化産物(AGE)受容体をターゲットとした創薬研究を構造生物学的な手法を用い進めている。この受容体(RAGE)とそのリガンドであるAGE、または大腸菌を用いて発現させ、精製・単離することでS1OOB・HMGB1得ると共に、これを用いて以下の実験を行った。(1)AGE・S1OOBを固定化したELISAを用い、該タンパク質とRAGEとの阻害活性を持つ低分子化合物を強い活性を持。また、Biacoreを用い、RAGEを固定化・化合物をアナライトとすることでRAGE-化合物間の解離を測定した。(2)これまでに、RAGEリコンビナントタンパク質であるvcRAGEの結晶化に成功している。得られた化合物をソーキングすることにより、複合体結晶構造解析を進めている。更に、効率的に研究を遂行するため、結晶の質の向上を目的に実験を進めている。(3)NMRを使用し、RAGEラベルタンパクを用いて低分子リガンドとのタイトレーション実験から複合体構造解析を進めている。(4)RAGEリガンドとしてHMGB1に注目し、ELISA・Biacoreを用いた変異導入実験から、結合サイトを予測した。更に、AGEとS100Bにおいて同様の実験を行い、比較を行うことで、HMGBI特有のRAGE結合サイトを見出した。X線構造解析・NMRを用いた情報が得られることにより、これまで明らかにされていなかったRAGE-リガンド結合部位の詳細が明らかになり、より簡便な低分子リガンド探索に繋がると考えている。

我々は終末糖化産物(AGE)受容体をターゲットとした創薬研究を構造生物学的な手法を用い進めている。この受容体(RAGE)とそのリガンドであるAGE、または大腸菌を用いて発現させ、精製・単離することでS1OOB・HMGB1得ると共に、これを用いて以下の実験を行った。(1)AGE・S1OOBを固定化したELISAを用い、該タンパク質とRAGEとの阻害活性を持つ低分子化合物を強い活性を持。また、Biacoreを用い、RAGEを固定化・化合物をアナライトとすることでRAGE-化合物間の解離を測定した。(2)これまでに、RAGEリコンビナントタンパク質であるvcRAGEの結晶化に成功している。得られた化合物をソーキングすることにより、複合体結晶構造解析を進めている。更に、効率的に研究を遂行するため、結晶の質の向上を目的に実験を進めている。(3)NMRを使用し、RAGEラベルタンパクを用いて低分子リガンドとのタイトレーション実験から複合体構造解析を進めている。(4)RAGEリガンドとしてHMGB1に注目し、ELISA・Biacoreを用いた変異導入実験から、結合サイトを予測した。更に、AGEとS100Bにおいて同様の実験を行い、比較を行うことで、HMGBI特有のRAGE結合サイトを見出した。X線構造解析・NMRを用いた情報が得られることにより、これまで明らかにされていなかったRAGE-リガンド結合部位の詳細が明らかになり、より簡便な低分子リガンド探索に繋がると考えている。