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天然毒と生体高分子の相互作用に基づく毒性発現メカニズムの解明

基于天然毒素与生物聚合物之间的相互作用阐明毒性表达机制

基本信息

批准号：
09J03683
负责人：
森朋子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度まで,独自の手法により開発したアフィニティ樹脂(Moli-gelと呼称している)の表面化学特性について精査し,また,担持する生理活性物質の周りの環境を制御することにより,標的タンパク質の捕捉に有利になることを実験的に証明してきた。本年度もさらに,細胞膜表面と同じ構造を有する2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine(親水的側鎖を有する)を用いて,Moli-gelに担持した4-carboxybenzenesulfonamideの周りの環境を制御し,タンパク質捕捉実験を行った。結果,予想通り,4-carboxybenzenesulfonamideの標的タンパク質であるCarbonic anhydraseII(親水的環境に存在)の捕捉を有利にできることがわかった。さらに,本年度は,湖沼等の淡水で産生される藍藻毒の一つであるミクロシスチン-LRの標的タンパク質探索を行った。ミクロシスチンが有するビニル基,または,カルボキシル基の異なる官能基をそれぞれ反応点としてMoli-gelに担持し,ブタ肝臓から調製したlysateを用いてタンパク質捕捉試験を行った。さらに,捕捉したタンパク質をSDS-PAGEにより分離し,バンドをゲルから切り出し,トリプシンを用いてゲル内で消化した後,LC-MS,および,Mascot databaseによりタンパク質を解析した。その結果,L-3-hydroxyacyl CoA dehydrogenase (HDHA)や,glutathione S-transferase (GST)が標的タンパク質の候補として挙げられた。ミクロシスチン-LRの新たな標的タンパク質候補を検索することに成功した。

Last year, we conducted a thorough investigation of the surface chemical characteristics of the resin (Moli-gel), and proved that it is beneficial to control the environment around the physiologically active substance. This year, 2-methacryloxyethyl phosphorylcholine(hydrophilic side chain) was used on the surface of cell membrane, and Moli-gel was used to control the environment of 4-carboxybenzenesulfonamide. As a result, it was found that the target of 4-carboxybenzenesulfonamide was characterized by the presence of Carbonic anhydrase II (hydrophilic environment) and its capture was beneficial. In addition, this year, we have been exploring the quality of cyanobacteria produced in freshwater such as lakes and marshes. The functional groups of the two groups are called Moli-gel, and they are called lysates. In addition, after capturing and separating the sample by SDS-PAGE, the sample was digested in the sample by LC-MS, and the sample was analyzed by Mascot database. As a result,L-3-hydroxyacyl CoA dehydrogenase (HDHA) and glutathione S-transferase (GST) were identified as candidate enzymes. The search for the new target was successful.