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マウスPIWIファミリーの機能と精子形成

小鼠 PIWI 家族功能和精子发生

基本信息

批准号：
09J04253
负责人：
北加奈子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

我々の研究室では、胎仔期において、MILI及びMIWI2がDNAのメチル化によるレトロトランスポゾンの制御に関与していることを見出したことから、これらのPIWIファミリータンパク質の機能を更に詳細に解析するために以下に記すトランスジェニックマウスを作成した。胎仔期ではDNAのレトロトランスポゾン遺伝子であるIAPやLine1の制御領域が高度にメチル化されることによってそれらのレトロトランスポゾンの発現が抑制されている。一方、MILI-KO及びMIWI2-KOマウスではDNAのレトロトランスポゾン遺伝子の制御領域のメチル化が低下することによって転写抑制が解除され、レトロトランスポゾンの転写が増加する。また、MILI及びMIWI2はsmall RNAであるpiRNAと結合し、そのpiRNAの中にはレトロトランスポゾンに対する配列も含まれている。しかし、そのpiRNAがMILI-KO及びMIWI2-KOマウスでは消失していることから、MILIまたはMIWI2はpiRNAを介してDNAメチル化によるレトロトランスポゾン制御に関与していると考えられる。また、胎仔期では、MILIは細胞質に局在する一方、MIWI2は核内に存在することから、MIWI2がこのDNAのメチル化機構に直接関与していることが示唆される。更に我々は、クロマチン免疫沈降法により、胎仔期の精巣においてMIWI2がゲノム、特にIAPやLine1の制御領域に結合していることも明らかにした。そこで、今回、DNAのトランスポゾン遺伝子の制御領域に結合するように設計したzinc fingerタンパクとMIWI2を融合したタンパク質を発現させるトランスジェニックマウスを作成し、このタンパク質の十分な発現を確認した。

Our laboratory has developed a detailed analysis of the function of DNA in fetal development, MILI, and MIWI2. During fetal life, the occurrence of DNA mutation is highly inhibited in the control domain of IAP Line1. One side, MILI-KO and MIWI2-KO are able to reduce the inhibition of DNA replication and increase the inhibition of DNA replication in the control domain. Miriam, Miriam and Miriam are small RNA molecules. Miriam, Miriam and Miriam are small RNA molecules. MIWI2-KO and MILI-KO are the most important genes in DNA synthesis. In the fetal period, MILI is directly related to the cytoplasmic structure, MIWI 2 is directly related to the nuclear structure, MIWI In addition, the immune sedimentation method, fetal sperm, MIWI2, IAP 1, and the control field are combined. In the control field of DNA, the design of zinc finger and MIWI2 fusion is confirmed.