ヒトPD-L1に関する研究

T細胞に発現するPD-1分子は、癌細胞上のリガンドであるPD-L1分子と相互作用することにより抑制性のシグナルを惹起し、T細胞の免疫応答を負に制御する。従って、抗腫瘍エフェクターT細胞上のPD-1/PD-L1相互作用を効果的に遮断することができれば、臨床において有効な癌治療法となると考えられる。本研究においては、ヒトγδ型T細胞に発現するPD-1分子からのネガティブシグナルを制御することにより、効率的ながん標識免疫療法を確立するための基盤解析を目指した。ヒトγδ型T細胞はピロリン酸系非ペプチド性抗原処理された腫瘍細胞を認識して活性化し、サイトカイン産生や細胞傷害活性を引き起こす。活性化したヒトγδ型T細胞はPD-1分子を発現するが、その機能や分子機構はほとんど解明されていない。本研究においては抗PD-L1抗体をツールとしたPD-1/PD-L1システムの機能解析モデルを作成して研究を行なった。まず、大腸菌を用いた組み替えタンパク質発現系を利用してヒトPD-L1の細胞外領域を封入体として発現させた。次に、アルギニンカオトロープを含む緩衝液内で迅速法によりリフォールディングを行い、精製後、組み換えタンパク質をマウスに免疫した。4回免疫後、脾臓を摘出し、SP2/0細胞と細胞融合を行った。得られたハイブリドーマの細胞培養上清をフローサイトメーターにかけスクリーニングを行い、組織染色が可能でPD-1/PD-L1結合阻害可能な抗PD-L1抗体を樹立した。乳癌の臨床検体を、作製した抗PD-L1抗体により組織染色して腫瘍組織におけるPD-L1の発現を検証した結果、乳癌細胞においてPD-L1の発現が確認された。これはPD-1/PD-L1システムによる免疫応答の抑制によって癌細胞が免疫監視機構から逃れる可能性を示唆する結果であった。現在、PD-L1を強制発現させた細胞株を用いた実験系においてヒトγδ型T細胞上のPD-1の分子機能を詳細に検討中である。

T細胞に発現するPD-1分子は、癌細胞上のリガンドであるPD-L1分子と相互作用することにより抑制性のシグナルを惹起し、T細胞の免疫応答を負に制御する。従って、抗腫瘍エフェクターT細胞上のPD-1/PD-L1相互作用を効果的に遮断することができれば、臨床において有効な癌治療法となると考えられる。本研究においては、ヒトγδ型T細胞に発現するPD-1分子からのネガティブシグナルを制御することにより、効率的ながん標識免疫療法を確立するための基盤解析を目指した。ヒトγδ型T細胞はピロリン酸系非ペプチド性抗原処理された腫瘍細胞を認識して活性化し、サイトカイン産生や細胞傷害活性を引き起こす。活性化したヒトγδ型T細胞はPD-1分子を発現するが、その機能や分子機構はほとんど解明されていない。本研究においては抗PD-L1抗体をツールとしたPD-1/PD-L1システムの機能解析モデルを作成して研究を行なった。まず、大腸菌を用いた組み替えタンパク質発現系を利用してヒトPD-L1の細胞外領域を封入体として発現させた。次に、アルギニンカオトロープを含む緩衝液内で迅速法によりリフォールディングを行い、精製後、組み換えタンパク質をマウスに免疫した。4回免疫後、脾臓を摘出し、SP2/0細胞と細胞融合を行った。得られたハイブリドーマの細胞培養上清をフローサイトメーターにかけスクリーニングを行い、組織染色が可能でPD-1/PD-L1結合阻害可能な抗PD-L1抗体を樹立した。乳癌の臨床検体を、作製した抗PD-L1抗体により組織染色して腫瘍組織におけるPD-L1の発現を検証した結果、乳癌細胞においてPD-L1の発現が確認された。これはPD-1/PD-L1システムによる免疫応答の抑制によって癌細胞が免疫監視機構から逃れる可能性を示唆する結果であった。現在、PD-L1を強制発現させた細胞株を用いた実験系においてヒトγδ型T細胞上のPD-1の分子機能を詳細に検討中である。