乳癌細胞におけるシグナル伝達ダイナミクスのリン酸化プロテオーム解析

乳腺癌细胞信号转导动力学的磷酸化蛋白质组学分析

• 批准号: 09J05184
• 负责人: 今見 考志
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J05184/
• 关键词: リン酸化プロテオミクス; シグナル伝達ネットワーク; キナーゼ阻害薬; 乳癌細胞; 質量分析計; SILAC法; シグナル伝達; プロテオーム

乳癌用分子標的薬ラパチニブのin vivo薬効評価を定量的リン酸化プロテオミクス手法を用いて行った。乳癌患者の25%で過剰発現している上皮増殖因子受容体2(HER2)は癌の増殖・浸潤に積極的に関わっているため、分子標的薬の多くはHER2をターゲットにしている。ラパチニブはHER1/2に対する選択性の高さからも最も臨床で用いられている分子標的薬である。一方、ラパチニブがin vivoにおいて細胞内シグナル伝達経路にどのように作用するかは分かっていない。今回我々は質量分析法に基づく定量的リン酸化プロテオミクス手法を用いることで、約5,000ものタンパク質リン酸化部位に対して、ラパチニブ処理によって誘導される濃度・時間依存的リン酸化シグナル動態をプロファイルすることに成功した。安定同位体標識した乳癌細胞から抽出したタンパク質を消化後、独自に開発したヒドロキ酸修飾金属クロマトグラフィーによってリン酸化ペプチドを選択的に濃縮し、質量分析計によりリン酸化ペプチドを同定・定量した。その結果、全同定リン酸化ペプチドのうち5%程度がラパチニブ処理によって変動しており、HER1/2シグナル伝達経路の既知分子のみならず多くの未知シグナル伝達分子を同定することに成功した。バイオインフォマティクス解析により、これまでラパチニブが作用することが報告されていなかった特定のタンパク質ネットワーク・複合体にもラパチニブが作用しうることを示した。また、HER1/2の21のリン酸化部位に対してそれらの濃度・時間依存的リン酸化ダイナミクスをプロファイルしたところ、領域特異的にリン酸化が制御されていることを明らかにした。HER1/2のリン酸化部位とチロシンキナーゼ活性との関係性を明らかにすることで、HER1/2の活性制御の理解と新たな薬剤標的に関する考察が得られることが期待できる。

Evaluation of the efficacy of molecular markers for breast cancer in vivo using the リラパチニブの in vivo treatment method. 25% of breast cancer patients have excess epithelial proliferation factor receptor 2 (HER2) cancer. The positive に关わっているため and the molecular target 薬の多くはHER2をターゲットにしている. For HER1/2 HER1/2, we selected the high-performance molecular target that is the most clinically useful. On the one hand, ラパチニブがin vivoにおいて intracellular シグナル伝达経路 にどのようにeffect するかは分かっていない. This time, I will use the 々は mass analysis method and the quantitative リロテオミクス technique to use いることで, and about 5,000 ものタンパクquality リン acidification department Depends on the concentration and time of the bituminous and ラパチニブ treatment induced されるThe saved リン acidified シグナル dynamic をプロファイルすることにsuccessfulした. The stable isotope marks the breast cancer cells and extracts the sterol and digests it, and independently opens the に発したヒドロキ acid-modified metal クロマトグThe ラフィーによってリン acidified ペプチドを selects the にconcentration method and the mass analyzer によりリン acidified ペプチドを same determination and quantification method.そのRESULTS, Identical acidified ペプチドのうち5% degree of がラパチニブtreatment によって変动しており, HER1 /2シグナル伝达経路のknownmoleculeのみならず多くのUnknownシグナル伝达moleculeを同定することに成した.バイオインフォマティクスanalyticsにより、これまでラパチニブがeffectすることがreportされていなかったSpecific のタンパクquality ネットワーク・Complex にもラパチニブが Effect しうることを Show した.また, HER1/2の21のリリンacidified site に対してそれらのConcentration and time-dependent リンacidified ダイナミクスをプロファイルしたところ, field-specific にリン acidified がcontrol されていることを明らかにした. H The understanding of the activity control of ER1/2 and the investigation of the new target have been investigated and expected.

项目成果

Can SILAC Quantitatively Characterize Phosphoproteome in Culture Cells?

SILAC 能否定量表征培养细胞中的磷酸化蛋白质组？

• 发表时间: 2009
• 作者: Akitsugu Konno;Miho Inoue-murayama;Toshikazu Hasegawa;渡邉浩平;青山弘之;今見考志
• 通讯作者: 今見考志

定量的リン酸化プロテオミクスを用いたラパチニブのin vivo薬効評価

使用定量磷酸蛋白质组学评估拉帕替尼的体内功效

• 发表时间: 2009
• 作者: Sakata Y;Kaneko S;Hayano A;Inoue-Murayama M;Ohgushi T;Isagi Y;Kimitaka Matsuzato;小山信裕;斉藤慶・中島淳・関島恒夫・島谷幸宏・河口洋一;今見考志
• 通讯作者: 今見考志

二重標識SILAC法を用いた乳癌細胞のシグナル伝達ダイナミクスのリン酸化プロテオーム解析

使用双标记 SILAC 方法对乳腺癌细胞信号转导动力学进行磷酸化蛋白质组学分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 高瀬識之;高橋裕里香;山根久和;野尻秀昭;今見考志
• 通讯作者: 今見考志

Quantitative proteome and phosphoproteome analyses of cultured cells based on SILAC labeling without requirement of serum dialysis

• DOI: 10.1039/b921379a
• 发表时间: 2010-01-01
• 期刊: MOLECULAR BIOSYSTEMS
• 作者: Imami, Koshi;Sugiyama, Naoyuki;Ishihama, Yasushi
• 通讯作者: Ishihama, Yasushi

定量的リン酸化プロテオーム解析による分子標的薬評価

通过定量磷酸化蛋白质组分析评价分子靶点药物

• 发表时间: 2009
• 作者: Noda;A.;Mitsui;Y.;Ikeda;H.;Setoguchi;H.;吉崎えり奈・及川康子・高村典子;杉山直幸
• 通讯作者: 杉山直幸