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哺乳類培養細胞の細胞分裂期におけるRNAの同定と蛍光可視化による位置情報解析

培养哺乳动物细胞分裂过程中 RNA 的鉴定以及使用荧光可视化的位置信息分析

基本信息

批准号：
09J07660
负责人：
千葉磨玲
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The Graduate University for Advanced Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、ヒトを含む哺乳類培養細胞を用いて、細胞分裂期におけるRNAの同定を行い、細胞分裂期におけるRNAのネットワーク機構の解明を目指した統合的な位置情報の決定を行うことである。1.哺乳類細胞分裂期染色体に局在するRNAの可視化哺乳類およびニワトリ細胞分裂期染色体に存在する全RNAの局在パターンを確認するため、ヒト培養細胞、ニワトリDT40細胞およびIndian muntjak細胞を用いて分裂期中期染色体展開標本の作成を行った。これら染色体標本をsytoRNA select、TOPRO-3で蛍光試薬を用いて染色を行ったところ、分裂期染色体上に存在するRNAに顕著なパターン、とくにサブテロメリック領域、セントロメア領域、そして染色体内在性領域にRNA由来の強いシグナルが検出された。2.哺乳類細胞分裂期染色体周辺部に局在するRNAの可視化これまでの研究から、Vero細胞の分裂期細胞において顕著な染色体を覆い囲む領域を、「分裂期染色体包括領域:mitotic chromosome coating sphere (MiCCS)」と呼ぶ構造体を確認することができ、哺乳類培養細胞でも同様な構造体を確認することができた。3.ヒト培養細胞・細胞分裂期に存在するRNAの同定及び定量解析分裂期細胞に特異的なRNA分子の同定を行う目的で、マイクロアレイチップを用いた解析を行った。その結果、間期細胞と分裂期細胞で比較したところ、分裂期においてシグナルが高かったものとして細胞骨格、リボソーム関連、クロマチン関連などといった分裂期および細胞再構築期に必要なタンパク質をコードするRNAが確認された。

The purpose of this study is to determine the identity of RNA in mammalian culture cells, the identity of RNA in cell division, and the identity of RNA in cell division. 1. Mammalian cell division phase chromosome localization RNA visualization Mammalian cell division phase chromosome localization RNA localization confirmation Mammalian cell division phase chromosome localization RNA localization DNA sequencing DNA sequencing DNA sequencing This chromosome contains RNA that is present on chromosomes during mitosis, and RNA that is present on chromosomes during mitosis. 2. Mammalian cell mitotic chromosome coating sphere (MiCCS): Mitotic chromosome coating sphere:Mitotic chromosome coating sphere (MiCCS):Mitotic chromosome coating sphere:Mitotic chromosome coating sphere 3. The identification and quantitative analysis of RNA in cultured cells and cells during division Results: Interphase cells and mitotic cells were compared, and RNA was identified during mitotic cells and mitotic cells.