生細胞における分裂期染色体のクロマチン環境の解析

活细胞有丝分裂染色体的染色质环境分析

• 批准号: 11J03110
• 负责人: 日原 さえら
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: The Graduate University for Advanced Studies
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J03110/
• 关键词: ヌクレオソーム; 核; 染色体; 一分子; 分裂期染色体; 1分子

はじめに私たちは、生きた細胞の凝集した分裂期染色体内部が、核と比べてどのような環境になっているかを蛍光相関分光法(FCS)で調べた。FCSは細胞内の微小な観察領域の蛍光分子(EGFPなど)の動きを検出する方法であり、蛍光分子の動きから染色体内部の「混雑度」を間接的に知ることができる。そして間期核、細胞質、分裂期染色体内部のEGFP分子の「拡散定数(動きやすさ)」を解析し、それぞれの環境を比較した。その結果、驚いたことに、高度に凝縮している分裂期染色体内でも、EGFPの拡散定数は、間期核内と比べて大きな差はみられなかった。この解析により、「分裂期染色体内部は高いヌクレオソーム濃度であるが、ヌクレオソーム自体が障害物とならずに、タンパク質が自由にアクセスできる環境である」という興味深い結果を得た。この結果から分裂期染色体内の個々のヌクレオソームが常に動いて(ゆらいで)いることが示唆された。そこで、私たちはこのヌクレオソームのゆらぎを調べるために、生細胞内のヌクレオソーム1分子の動きを直接イメージングする技術を開発した。固定細胞で決定した測定条件に基づき、生きた細胞で1分子観察を行った。結果、生細胞の30ミリ秒間でのヌクレオソームの平均移動距離は、間期核と分裂期染色体で大きな違いがなく、また50nm以上であり、30nmよりも大きかった。このことから、分裂期染色体や核内に存在すると言われていた、規則的な30nmクロマチン線維が細胞内でほとんど存在しないことを、支持するものと考えている。また、興味深いことに、グルタルアルデヒドよりも弱い架橋であるホルムアルデヒド固定では、生細胞と比べても遜色ないほどの移動距離がみられた。このことは、個々ヌクレオソームの動きは、Arpに依存せず、ブラウン運動による「ゆらぎ」であるという、今までにない新たな考えを生み出した。

Cell agglutination was used to detect the internal and nuclear DNA of mitotic chromosomes. Environmental protection was detected by photoluminescence spectroscopy (FCS). In the field of FCS cytosol monitoring, EGFP molecules are activated to detect the "mixing" in the chromosomes of photoluminescence molecules. The molecular weight of EGFP in the nucleus, mitotic cell and mitotic stage of the chromosome was analyzed by the kinetic assay, and the environmental profile was analyzed. The results showed that there was a significant difference in the results, the number of EGFP in the mitotic chromosome, the number of DNA in the mitotic chromosome and the ratio of the nuclei in the mitotic period. In the analysis of the disease, the high levels of DNA in the chromosomes during the mitotic period, the levels of DNA in the chromosomes during the mitotic period, the levels of DNA in the chromosomes during the mitotic period, the levels of DNA in the chromosomes during the mitotic period, the levels of DNA in the chromosomes during the mitotic period, the levels of DNA in the chromosomes during the mitotic period, the levels of DNA in the chromosomes during the mitotic period, the levels of DNA in the chromosomes of the mitotic chromosomes were analyzed, and the results showed that the results were very good. The results showed that the two chromosomes in the mitotic chromosome showed that the two chromosomes were instigated during mitosis. In this way, we have to do some research in the field of technology and technology in the cell. The fixed cell determines the determination of the condition, and the molecule of the cell is observed. Results: the results showed that the average migration distance of chromosomes during mitosis, 50nm and 30nm were measured within 30 seconds. There is an error in the nucleus of the chromosome during the mitotic phase, there is a gene in the nucleus of the chromosome during the mitotic period, and there is a gene in the cell of the rule, and there is a 30nm in the cell. There is a bad smell, a bad smell, a bad Today's new college students will not be able to take part in the new college entrance exams. The students will not be allowed to take part in the new college entrance examination. The students will not be allowed to attend the Arp program.

项目成果

How can we know the chromatin environment in living cells?-Structural analysis of mitotic chromosomes in living cells-

如何了解活细胞中的染色质环境？-活细胞有丝分裂染色体的结构分析-

• 发表时间: 2011
• 作者: M.Ishiguro;et al;石黒正貴;Takeshi Ogasawara;Takeshi Ogasawara;小笠原健;Takeshi Ogasawara;Takeshi Ogasawara;小笠原健;小笠原健;小笠原健;小笠原健;日原さえら
• 通讯作者: 日原さえら