悪性腫瘍特異的なRNA選択的スプライシングを制御する抗がん剤の開発

开发控制恶性肿瘤特异性RNA选择性剪接的抗癌药物

• 批准号: 21200074
• 负责人: 野島 孝之
• 金额: $ 13.4万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research a proposed research project)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21200074/
• 关键词: 悪性腫瘍; RNA選択的スプライシング; ピルビン酸キナーゼ(PKM); 蛍光タンパク質; レポーター

悪性腫瘍による死亡は増加し続け、2030年には世界で1140万人が悪性腫瘍で死亡すると予測されている。そのため、悪性腫瘍の画期的な治療法の確立は最優先で行われるべき研究のひとつであると考えられる。以前、申請者を含めたグループはRNAスプライシングを標的した抗がん剤候補化合物を報告しており(Nature Chem.Biol., 2007)、スプライシング制御は悪性腫瘍治療の新しいターゲットに成り得ると期待されている。申請者はRNA選択的スプライシング制御により、がん細胞特異的なスプライシングバリアントの生成を抑制することで、がん細胞の種類を問わず効果を発揮する、副作用の少ない画期的な抗がん剤の開発を目指している。最近、解糖系律速酵素のひとつであるピルビン酸キナーゼ(pyruvate kinase type-muscle : PKM)遺伝子の発現制御ががん細胞の増殖に密接に関係していることが報告されたことから、申請者はPKM遺伝子のスプライシングに注目し、研究を遂行してきた。PKM遺伝子はPKM1タンパク質とPKM2タンパク質という2つのアイソフォームを選択的スプライシングによって産生する。正常組織ではエクソン9を含むPKM1、ほとんど全てのがん組織ではエクソン10を含むPKM2が選択されるようになる。申請者は、それぞれのエクソンを選択した際に異なる蛍光タンパク質を発現するレポーターの構築に成功した。このPKMレポーターは、エクソン9を選択する時には緑色蛍光タンパク質GFPを、エクソン10を選択するときには赤色蛍光タンパク質RFPを発現するように設計されている。現在、このレポーターを安定的に発現するマウス筋芽細胞C2C12を樹立している。このPKMレポーター細胞と化合物ライブラリー(購入したFDA認可化合物ライブラリー約700種または東京医科歯科大学の低分子化合物ライブラリー約20,000種)を用いてスクリーニングを始める準備をしているところであり、GFP(正常細胞型)を発現させる化合物の取得を試みている。

悪 sex is swollen sores に よ る death は raised plus し 続 け, 2030 に 11.4 million で は world が 悪 sex is swollen sores で す death る と be さ れ て い る. そ の た め, 悪 sex is swollen sores の painting period な therapy は の established top priority line で わ れ る べ き research の ひ と つ で あ る と exam え ら れ る. Ago, applicants を め た グ ル ー プ は RNA ス プ ラ イ シ ン グ を mark し た resistance が ん tonic alternate compound を report し て お り (Nature Chem. Biol., 2007), ス プ ラ イ シ ン グ suppression は 悪 sex is swollen sores treatment の new し い タ ー ゲ ッ ト に into り get る と expect さ れ て い る. Applicants は RNA sentaku ス プ ラ イ シ ン グ suppression に よ り, が ん cell specific な ス プ ラ イ シ ン グ バ リ ア ン ト の を inhibition of す る こ と で, が の ん cell types を asked わ ず unseen fruit を 発 swing す る, less side effects の な い painting period な resistance が ん tonic の open 発 を refers し て い る. Recently, sugar solution law speed enzyme の ひ と つ で あ る ピ ル ビ ン acid キ ナ ー ゼ (pyruvate kinase type - muscle: PKM) posthumous son 伝 の 発 now suppression が が ん cells の raised colonization に contact に masato is し て い る こ と が report さ れ た こ と か ら, applicants は PKM heritage 伝 son の ス プ ラ イ シ ン グ に attention し, research を carries out し て き た. Traces of PKM 伝 son は PKM1 タ ン パ ク qualitative と PKM2 タ ン パ ク qualitative と い う 2 つ の ア イ ソ フ ォ ー ム を sentaku of ス プ ラ イ シ ン グ に よ っ て produce す る. Normal tissue で は エ ク ソ ン contains 9 を む PKM1, ほ と ん ど full て の が ん organization で は エ ク ソ ン contains 10 を む PKM2 が sentaku さ れ る よ う に な る. Applicants は, そ れ ぞ れ の エ ク ソ ン を sentaku し た interstate に different な る 蛍 light タ ン パ ク qualitative を 発 now す る レ ポ ー タ ー built の に success し た. こ の PKM レ ポ ー タ ー は, エ ク ソ ン 9 を sentaku す る when に は 蛍 green light タ ン パ ク qualitative GFP を, エ ク ソ ン 10 を sentaku す る と き に は red light 蛍 タ ン パ ク qualitative RFP を 発 now す る よ う に design さ れ て い る. Now, こ の レ ポ ー タ ー を stable に 発 now す る マ ウ ス reinforcement bud C2C12 cells を set し て い る. こ の PKM レ ポ ー タ ー cells と compound ラ イ ブ ラ リ ー (buy し た fda-approved compound ラ イ ブ ラ リ ー about 700 kinds of ま た は Tokyo medical 歯 university の low molecular compound ラ イ ブ ラ リ ー about 20000) を with い て ス ク リ ー ニ ン グ を beginning め る prepare を し て い る と こ ろ で あ り, GFP (normal cell type) を 発 The させる compound させる yields を test みて る る.

项目成果

Herpesvirus protein ICP27 switches PML isoform by altering mRNA splicing.

• DOI: 10.1093/nar/gkp633
• 发表时间: 2009-10
• 期刊: Nucleic acids research
• 影响因子: 14.9
• 作者: Nojima T;Oshiro-Ideue T;Nakanoya H;Kawamura H;Morimoto T;Kawaguchi Y;Kataoka N;Hagiwara M
• 通讯作者: Hagiwara M

HSV-2増殖に関わるPMLアイソフォーム発現制御

HSV-2 增殖中 PML 亚型表达的调节

• 发表时间: 2009
• 作者: Hwang GW;Wada N;Kuge S;Naganuma A.;野島孝之
• 通讯作者: 野島孝之

細胞工学(特集)RNAスプライシングの可視化による創薬スクリーニング

细胞工程（专题）通过RNA剪接可视化进行药物发现筛选

• 发表时间: 2010
• 作者: Tachibana T;Okazaki S;Murayama A;Naganuma A;Nomoto A;Kuge S.;野島孝之
• 通讯作者: 野島孝之

実験医学(増刊)ウイルスによるスプライシング暗号の利用と撹乱

实验医学（增补版）病毒剪接密码的利用与破坏

• 发表时间: 2009
• 作者: 矢野環;塩川裕子;白田陽一;大島吉輝;倉田祥一朗;野島孝之
• 通讯作者: 野島孝之