Verknüpfung molekularphysiologischer und reaktionskinetischer Werkzeuge zum Studium der in-vivo Regulation des Glucosetransports in Saccharomyces cerevisiae

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Mit dem vorliegenden Fortsetzungsantrag soll das interdisziplinäre Projekt zu molekularphysiologischen und reaktionskinetischen Fragen des Glucosetransports in Saccharomyces cerevisiae im Sinner der im Originalantrag formulierten Zielvorstellungen zu einem vorläufigen Abschluß gebracht werden. Die noch ausstehenden Arbeiten umfassen die Suche und zusätzliche Deletion eines noch unbekannten Glucosetransportergens, um einen kompletten hxt-Nullstamm zu konstruieren, Untersuchungen zur Wechselwirkung der Transporter untereinander, die verbesserte Konstruktion eines neuen Stamms mit hoher Transportrate und die Bereitstellung von Mutanten mit verschiedenen PhosphoglucoseIsomerase-Aktivitäten (Antragsteller B). Antragsteller A wird die implementierte Methode der Stopped-Flow-Probenahme für die quantitative Charakterisierung der verschiedenen Transporter unter Berücksichtigung der intrazellulären Konzentrationen (freie Glucose und Glucose-6-Phosphat) nutzen. Des weiteren sind Untersuchungen mit der Mutante mit erhöhten Transportraten in konitnuierlichen Kulturen geplant. Schließlich sollen einige Arbeiten zur Frage der Expression der verschiedenen Transporter bei zyklischer dynamischer Anregung durch Glucose durchgeführt werden.