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神経軸索誘導における新しい受容体EVA-1の解析

神经轴突引导新受体EVA-1分析

基本信息

批准号：
21500331
负责人：
藤澤和子
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21500331/
关键词：
神経発生分化異常線虫軸索誘導

项目摘要

線虫において神経軸索誘導因子であるSLT-1/Slitの新規の受容体、EVA-1(enhancer of ventral guidance-1)を同定したが、EVA-1はヒトのダウン症候群の責任領域に存在するC21orf63と相同性があり、ヒトにおいても重要な機能を担っている可能性がある。EVA-1は一回膜貫通型受容体で、細胞外にガラクトース結合領域が二つあり、細胞内にはS/Rの豊富な領域や、リン酸化チロシン結合領域(PTB domain)と結合することで知られるNPXYモチーフがある。SLT-1やSAX-3との結合を介して、AVM軸索誘導を行うのに必要な領域を同定する目的で、EVA-1細胞内領域、細胞外領域のモチーフを基にいろいろな領域の欠損変異体(遺伝子)を作成した。この遺伝子をEVA-1欠損変異株にインジェクション、レスキュー活性を指標に、どの領域がAVM神経軸索の誘導異常を是正するのに必要か調べた。その結果、SLT-1依存性のAVM神経軸索誘導には細胞内領域は必要ない、つまり、細胞外領域と膜貫通領域のみで十分であることが示唆された。そこで、さらに詳しい細胞外領域の検討を行うため、培養細胞を用いた生化学実験によりSLT-1もしくはSAX-3との結合を調べる目的で、変異体遺伝子を作成した。このとき、EVA-1のガラクトース結合領域の重要性も検討するため、SLT-1は培養細胞だけでなく、線虫にも発現させ、実際にSLT-1としての機能を持つタンパク質の発現を確認した。

The new receptor of SLT-1/Slit and EVA-1(enhancer of ventricular guidance-1) are identical, and EVA-1 is identical to the domain of responsibility of SLT-1/Slit syndrome. EVA-1 is a membrane-penetrating receptor, an extracellular receptor binding domain, an intracellular receptor binding domain (PTB domain), and an intracellular receptor binding domain (S/R domain). For the purpose of determining the necessary domain for the induction of AVM axons, the binding of STP-1 and SAX-3 was determined. For EVA-1, the intracellular domain and extracellular domain were determined. This gene is called EVA-1. It is necessary to regulate the activity of AVM and the induction of abnormal AVM axons. The results showed that SLT-1-dependent AVM axonal induction was necessary in the intracellular domain, in the extracellular domain, and in the membrane-penetrating domain. In addition, in the field of extracellular research, cell culture, biochemical research, SLT-1, SAX-3, and regulation, the production of heterologous genes. The importance of EVA-1 in combination with SLT-1 in cell culture, development of line worms, and functional maintenance of SLT-1 in combination with SLT-1 was discussed.