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網膜色素上皮におけるGPx4可視光障害について

关于GPx4可见光对视网膜色素上皮的损伤

基本信息

批准号：
10J06326
负责人：
上田高志
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J06326/
关键词：
抗酸化酵素 GPx4 視細胞網膜変性脈絡膜新生血管光障害 VEGF PGC-1 alpha 酸化ストレス

项目摘要

視細胞特異的なGPx4のconditional knockout(cKO)マウスを作製したところ、P12までは正常な網膜形成が観察されたが、その後、急速に視細胞は脱落し、P21までに視細胞は全て消失した。このドラスティックな表現形のメカニズムを探るべく、以下のような検討を加えた。1.細胞死のメカニズムとして、TUNEL陽性細胞を伴うものであることを確認した。また、apoptosis inducing factor(AIF)の免疫染色を行って、cKOマウスの視細胞ではcontrolマウスには認められない核移行の現象を確認した。よってcKOにおける視細胞死のメカニズムとしてAIF-dependentなapoptosisであることが明らかとなった。2.Wild-typeマウスにおけるGPx4タンパクの視細胞での局在が外節ではなく内節に特に多く発現していることから、GPx4のsplicing variantsのうちミトコンドリア型GPx4が視細胞にとって重要なのではないかと考えた。実際、cKOマウスでは視細胞の脱落が起きる以前よりミトコンドリアDNAのreplicationや量が減少していることを明らかにした。また、cKOマウスの視細胞では視細胞死が起きる以前よりconnecting ciliaの数が減少しており、外節の構造異常をきたしていることが分かった。また、光による色素上皮(RPE)におけるVEGF発現と脈絡膜血管新生(CNV)増大作用についても並行して実験を行った。マウスに対する強い生理光を15lxと定義し(光によるマウスの退避行動の結果に基づく)、RPEでVEGFの発現上昇とCNV増大を確認した。そして、そのメカニズムとして、強い生理光→RPEによる視細胞外節の貧食亢進→PGC-1 alphaのoveractivation→VEGF upregulation→CNV増大、であることを明らかにした。この結果は現在論文を投稿中である。

The special GPx4 conditional knockout (cKO) cell is used to detect the formation of the normal network of the P12 cell. After that, the cell falls off rapidly, and the cell of the P21 cell disappears completely. The following is a list of figures in the form of a table. 1. The death of the cell, the death of the cell and the sexual cell of TUNEL. Immunocytochemistry, apoptosis inducing factor (AIF) immunostaining, cKO immunostaining, control immunostaining, control immunostaining and nuclear transfer immunostaining were used. CKO, apoptosis, dead, dead. 2.Wild-type