MGL1による腸内共生細菌の認識を通した免疫・炎症応答の軽減機構の解明

阐明 MGL1 通过识别肠道共生细菌减少免疫和炎症反应的机制

• 批准号: 10J10365
• 负责人: 藏品 良祐
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J10365/
• 关键词: MGL1; 大腸マクロファージ; 抗炎症性サイトカイン; hemITAM; 共生細菌; 乳酸菌; Syk; ERK; Lectin; MGL1,MGL2; 大腸炎; Interleukin 10; 腸内共生細菌

Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS)により大腸炎を誘導したマウスの腸管膜リンパ節から単離した腸内共生細菌の一つであるStreptococcusから、5Mグアニジン塩酸で処理することにより、MGL1結合性の分子を含む抽出物を得ることに成功した。さらに、この抽出物から、インゲン豆レクチンであるPHA-L4-アガロースビーズを用いて免疫沈降させた結果、MGL1結合性の分子を吸着させることが可能になった。現在、MGL1結合性の分子をSDS-PAGEにて展開し、ゲルの切り出しを行って質量分析法により解析している。野生型マウスの腸管におけるMGL1を発現している固有層マグロファージと大腸に浸潤した腸内共生細菌のStreptococcusとが直接認識することにより、抗炎症サイトカインであるInterieukin 10(IL-10)の遺伝子発現誘導が認められ、hemITAMの下流に存在すると知られているCARD9を経由することを明らかとした。そこで、私は、菌体によるMGL1を介するシグナルがhemITAMと会合するSpleen tyrosine kinase(Syk)を活性化するか否か、IL-10の発現誘導におけるSykの役割を検討した。さらに、転写因子であるNF-κB経路やMAPKs経路のp38には影響を及ぼさず、MAPKs経路のERKのみを活性化することを明らかとし、MGL1が初めてシグナルを伝えたことを裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。これまで、私は炎症を誘導したマウスの腸管から単離した腸内共生細菌に着目してIL-10の発現解析を行ってきたが、プロバイオティクスとして知られている乳酸菌においてもMGL1に対する結合性とIL-10の発現誘導活性に相関があるか否かを検討した。MGL1に結合を示したL.casei, L.gasseri, L.delbrueckii brugaricusは、大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導することを明らかとした。このIL-10の発現誘導はMgl1-KOマウス由来の大腸マクロファージではこれらの発現誘導は観察されなかった。以上のことから、マウス腸管から単離したMGL1結合性の共生細菌だけでなく、MGL1の結合性を有するプロバイオティクスが大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導する活性があることを明らかとした。明らかとし、MGL1が初めてシグナルを伝えたことを裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。これまで、私は炎症を誘導したマウスの腸管から単離した腸内共生細菌に着目してIL-10の発現解析を行ってきたが、プロバイオティクスとして知られている乳酸菌においてもMGL1に対する結合性とIL-10の発現誘導活性に相関があるか否かを検討した。MGL1に結合を示したL.casei, L.gasseri, L.delbrueckii brugaricusは、大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導することを明らかとした。このIL-10の発現誘導はMgl1-KOマウス由来の大腸マクロファージではこれらの発現誘導は観察されなかった。以上のことから、マウス腸管から単離したMGL1結合性の共生細菌だけでなく、MGL1の結合性を有するプロバイオティクスが大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導する活性があることを明らかとした。

Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS) is an effective inhibitor of colitis induced by streptococci and 5-methyl-sulfuric acid. MGL1-binding molecules are successfully extracted from intestinal membrane. The results of immunoprecipitation and adsorption of MGL1-binding molecules are as follows: Now, MGL1 binding molecules were developed by SDS-PAGE, and analyzed by mass spectrometry. Wild type MGL1 is detected in the gut, the lamina propria, large intestine infiltrates, intestinal symbiotic bacteria Streptococcus, direct recognition, anti-inflammatory, induction of gene expression, recognition of hemITAM downstream presence, CARD9 is detected. MGL1 expression in cells, cells, and cells was investigated for hemITAM and Spleen tyrosine kinase(Syk) activation and IL-10 induction. The NF-κB pathway and p38 of MAPKs pathway are affected by the activation of ERK in MAPKs pathway. The expression of IL-10 in intestinal symbiotic bacteria was analyzed and the correlation between IL-10 expression and binding activity of MGL1 in lactic acid bacteria was discussed. L.casei, L.gasseri, L.delbrueckii brugaricus, L. coli, L. coli The expression of IL-10 was detected by PCR. The expression of IL-10 in the colon was induced by the presence of MGL1-associated symbiotic bacteria. MGL1 is the first to be published. The expression of IL-10 in intestinal symbiotic bacteria was analyzed and the correlation between IL-10 expression and binding activity of MGL1 in lactic acid bacteria was discussed. L.casei, L.gasseri, L.delbrueckii brugaricus, L. coli, L. coli The expression of IL-10 was detected by PCR. The expression of IL-10 in the colon was induced by the presence of MGL1-associated symbiotic bacteria.

项目成果

腸管マクロファージにおけるC型レクチンMGL1/CD301aによる共生細菌の認識を通してのIL-10の発現誘導機構

肠道巨噬细胞中C型凝集素MGL1/CD301a识别共生菌诱导IL-10表达的机制

• 发表时间: 2011
• 作者: Kiyomi Sasaki;S.M.Abdur Rahman;Norihiro Sato;Satoshi Obika;Takeshi Imanishi;Hidetaka Torigoe;佐藤憲大・片山拓馬・佐々木澄美・鳥越秀峰;山本剛史・斯波真理子・和田俊輔・生川径祐・鳥越秀峰・佐々木澄美・山岡哲二・今西武・小比賀聡;藏品良祐
• 通讯作者: 藏品良祐