新発想RT-DDSによるアレルギー・免疫疾患の遺伝子治療法の開発

利用新概念RT-DDS开发过敏性和免疫性疾病的基因治疗方法

• 批准号: 10J10483
• 负责人: 小出 裕之
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J10483/
• 关键词: リポソーム; Drug delivery system; siRNA; RT-DDS; スギ花粉症; Cri j 1; ポリチオンリボソーム; durg delivery system; Reverse Targeting DDS

私は、Reverse Targeting DDS(RT-DDS)を用いたアレルギー・免疫疾患の遺伝子治療法の開発を目的として研究を行ってきた。本研究では、RT-DDS技術によるsiRNAのデリバリーのために、モデル抗原として卵白アルブミン(ovalbumin ; OVA)を用い、製剤開発のための基礎検討、さらに、アレルギー疾患への応用に向け、スギ花粉(Cry j1)を用いたRT-DDS技術の確立を目指して行った。siRNAデリバリーベクターは、ポリカチオン脂質であるdicetyl phosphate-tetraethylenepentamine(DCP-TEPA)を基盤としたポリカチオンリポソーム(PCL)を用いることで、リポソームをプラスに帯電させ、マイナス電荷のsiRNAを修飾する方法を選択した。脂質誘導体PEG-maleimideをリンカー分子とし、OVAをリポソーム外膜に修飾することに成功した。また本ベクターはin vitroにおいてOVA抗体と特異的な結合能を示し、選択的siRNA送達キャリアとしての可能性が示された。また、その有用性はOVA感作マウスにおける脾臓の組織学的解析からも示唆された。続いて、siRNAを用いた遺伝子治療法の確立に先立ち、一般的なリポソーム組成であるDPPC/Cho=2:1のリポソームにCry j 1を修飾し、治療方法の確立を目指した。本研究ではこれまでに、スギ花粉からCry j 1を効率良く抽出・精製する方法を確立し、Cry j 1修飾リポソームがCry j 1特異的lgG1抗体と特異的かつ高い結合性を示すことが明らかにしてきた。今年度は、スギ花粉症モデルマウスを用いたin vivo実験を行った。脾臓内における詳細な局在を検討したところ、Cry j 1修飾リポソームは脾臓内に存在するB細胞集団と共局在していたのに対し、未修飾のリポソームはその周囲にのみ存在していることが確認された。さらに興味深いことに、Cry j 1修飾リポソームはB細胞集団のうち、分化成熟の場として知られる胚中心に多く集積することが明らかとなった。以上の結果より、Cry j 1修飾リポソームはCry j 1特異的免疫細胞群への標的性を有することが示唆され、スギ花粉症根治療法確立への可能性が示された。

Private は, Reverse Targeting DDS (RT - DDS) を い た ア レ ル ギ ー, immune disorders の heritage 伝 child therapy の open 発 を purpose と し を line っ て research て き た. This study で は, RT - DDS technology に よ る siRNA の デ リ バ リ ー の た め に, モ デ ル antigen と し て albumen ア ル ブ ミ ン (ovalbumin; OVA) use い, tonic を 発 の た め の based beg, さ 検 ら に, ア レ ル ギ ー disorders へ の 応 に to け, ス ギ pollen (Cry j1) を with い の た RT - DDS technology to establish を refers し て line っ た. siRNAデリバリ デリバリ ベ <s:1> タ タ, ポリカチ ポリカチ <s:1> lipids であるdicetyl Phosphate - tetraethylenepentamine を base plate (DCP) - TEPA) と し た ポ リ カ チ オ ン リ ポ ソ ー ム (PCLS) を い る こ と で, リ ポ ソ ー ム を プ ラ ス に 帯 electric さ せ, マ イ ナ ス charge の siRNA を modified す る method を sentaku し た. PEG - induced lipid body maleimide を リ ン カ ー molecular と し, OVA を リ ポ ソ ー ム に outer membrane modified す る こ と に successful し た. ま た this ベ ク タ ー は in vitro に お い て と specific な OVA antibody binding energy を し, sentaku siRNA served キ ャ リ ア と し て が の possibility in さ れ た. Youdaoplaceholder0, そ, the usefulness of また OVA for the analysis of the histology of ウスにおける splenic tissue また ら indicates された. 続 い て, siRNA を with い た heritage 伝 child therapy の establish に ち, general first な リ ポ ソ ー ム composition で あ る DPPC/Cho = 2:1 の リ ポ ソ ー ム に Cry 1 を modified し j, treatment の establish を refers し た. This study で は こ れ ま で に, ス ギ pollen か ら Cry j 1 を sharper rate good く extraction, refining す を る method established し, Cry j 1 modification リ ポ ソ ー ム が Cry j 1 specific antibody と lgG1 specific か つ high い associativity を shown す こ と が Ming ら か に し て き た. This year, モデ, スギ pollen syndrome モデ, モデ and ウスを were treated with た たin vivo experiment を to った. Within the splenic に お け る な bureau in detail を beg し 検 た と こ ろ, Cry j 1 modification リ ポ ソ ー ム は splenic に exist within す る B cell set 団 と total bureau in し て い た の に し seaborne, undecorated の リ ポ ソ ー ム は そ の weeks 囲 に の み exist し て い る こ と が confirm さ れ た. さ ら に tumblers deep い こ と に, Cry j 1 modification リ ポ ソ ー ム は B cell set 団 の う ち, matured の と し て know ら れ る germinal center に く set product more す る こ と が Ming ら か と な っ た. の above results よ り, Cry j 1 modification リ ポ ソ ー ム は Cry j 1 specific immune cells へ の mark sex を have す る こ と が in stopping さ れ, ス ギ hay fever curatie treatment establishment へ が の possibility in さ れ た.

项目成果

mTORを標的としたRNA干渉の展開を目指して

旨在开发针对 mTOR 的 RNA 干扰

• 发表时间: 2012
• 作者: Lili Win;小出裕之;et al
• 通讯作者: et al