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新発想RT-DDSによるアレルギー・免疫疾患の遺伝子治療法の開発

利用新概念RT-DDS开发过敏性和免疫性疾病的基因治疗方法

基本信息

批准号：
10J10483
负责人：
小出裕之
金额：
$ 0.9万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J10483/
关键词：
リポソーム Drug delivery system siRNA RT-DDS スギ花粉症 Cri j 1 ポリチオンリボソーム durg delivery system Reverse Targeting DDS

项目摘要

私は、Reverse Targeting DDS(RT-DDS)を用いたアレルギー・免疫疾患の遺伝子治療法の開発を目的として研究を行ってきた。本研究では、RT-DDS技術によるsiRNAのデリバリーのために、モデル抗原として卵白アルブミン(ovalbumin ; OVA)を用い、製剤開発のための基礎検討、さらに、アレルギー疾患への応用に向け、スギ花粉(Cry j1)を用いたRT-DDS技術の確立を目指して行った。siRNAデリバリーベクターは、ポリカチオン脂質であるdicetyl phosphate-tetraethylenepentamine(DCP-TEPA)を基盤としたポリカチオンリポソーム(PCL)を用いることで、リポソームをプラスに帯電させ、マイナス電荷のsiRNAを修飾する方法を選択した。脂質誘導体PEG-maleimideをリンカー分子とし、OVAをリポソーム外膜に修飾することに成功した。また本ベクターはin vitroにおいてOVA抗体と特異的な結合能を示し、選択的siRNA送達キャリアとしての可能性が示された。また、その有用性はOVA感作マウスにおける脾臓の組織学的解析からも示唆された。続いて、siRNAを用いた遺伝子治療法の確立に先立ち、一般的なリポソーム組成であるDPPC/Cho=2:1のリポソームにCry j 1を修飾し、治療方法の確立を目指した。本研究ではこれまでに、スギ花粉からCry j 1を効率良く抽出・精製する方法を確立し、Cry j 1修飾リポソームがCry j 1特異的lgG1抗体と特異的かつ高い結合性を示すことが明らかにしてきた。今年度は、スギ花粉症モデルマウスを用いたin vivo実験を行った。脾臓内における詳細な局在を検討したところ、Cry j 1修飾リポソームは脾臓内に存在するB細胞集団と共局在していたのに対し、未修飾のリポソームはその周囲にのみ存在していることが確認された。さらに興味深いことに、Cry j 1修飾リポソームはB細胞集団のうち、分化成熟の場として知られる胚中心に多く集積することが明らかとなった。以上の結果より、Cry j 1修飾リポソームはCry j 1特異的免疫細胞群への標的性を有することが示唆され、スギ花粉症根治療法確立への可能性が示された。

Research on the development of Reverse Targeting DDS(RT-DDS) for immune diseases In this study, we aimed to establish the RT-DDS technology for siRNA detection, detection, detection of ovalbumin (OVA), detection and detection of Cry j1. siRNA is a highly selective, highly selective, and highly charged siRNA that is modified by the presence of dicetyl phosphate-tetraethylenamine (DCP-TEPA) as a substrate and by the presence of PCL. The lipid inducer PEG-maleimide was successfully modified by the outer membrane. This article shows the possibility of siRNA-specific binding activity in vitro and siRNA-specific delivery. The histological analysis of the spleen was carried out by the author. The establishment of gene therapy with siRNAs is a prerequisite for the establishment of a general solution composition such as DPPC/Cho=2:1 and the modification of Cryj1. In this study, we established a method for the efficient extraction and purification of Cry j1 from pollen, and demonstrated the high binding of Cry j1-specific lgG1 antibodies to pollen. This year, the pollen is used in vivo. The presence of B-cell clusters in the presence of Cry J 1 modified proteins. In addition, Cry J 1 modified the B cell pool and differentiated the mature field. The above results indicate that Cryj1 modification may be a target for Cryj1-specific immune cell populations, and that it may be possible to establish a cure for pollinosis.