新発想RT-DDSによるアレルギー・免疫疾患の遺伝子治療法の開発

利用新概念RT-DDS开发过敏性和免疫性疾病的基因治疗方法

基本信息

批准号：
10J10483
负责人：
小出裕之
金额：
$ 0.9万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J10483/
关键词：
リポソーム Drug delivery system siRNA RT-DDS スギ花粉症 Cri j 1 ポリチオンリボソーム durg delivery system Reverse Targeting DDS

项目摘要

私は、Reverse Targeting DDS(RT-DDS)を用いたアレルギー・免疫疾患の遺伝子治療法の開発を目的として研究を行ってきた。本研究では、RT-DDS技術によるsiRNAのデリバリーのために、モデル抗原として卵白アルブミン(ovalbumin ; OVA)を用い、製剤開発のための基礎検討、さらに、アレルギー疾患への応用に向け、スギ花粉(Cry j1)を用いたRT-DDS技術の確立を目指して行った。siRNAデリバリーベクターは、ポリカチオン脂質であるdicetyl phosphate-tetraethylenepentamine(DCP-TEPA)を基盤としたポリカチオンリポソーム(PCL)を用いることで、リポソームをプラスに帯電させ、マイナス電荷のsiRNAを修飾する方法を選択した。脂質誘導体PEG-maleimideをリンカー分子とし、OVAをリポソーム外膜に修飾することに成功した。また本ベクターはin vitroにおいてOVA抗体と特異的な結合能を示し、選択的siRNA送達キャリアとしての可能性が示された。また、その有用性はOVA感作マウスにおける脾臓の組織学的解析からも示唆された。続いて、siRNAを用いた遺伝子治療法の確立に先立ち、一般的なリポソーム組成であるDPPC/Cho=2:1のリポソームにCry j 1を修飾し、治療方法の確立を目指した。本研究ではこれまでに、スギ花粉からCry j 1を効率良く抽出・精製する方法を確立し、Cry j 1修飾リポソームがCry j 1特異的lgG1抗体と特異的かつ高い結合性を示すことが明らかにしてきた。今年度は、スギ花粉症モデルマウスを用いたin vivo実験を行った。脾臓内における詳細な局在を検討したところ、Cry j 1修飾リポソームは脾臓内に存在するB細胞集団と共局在していたのに対し、未修飾のリポソームはその周囲にのみ存在していることが確認された。さらに興味深いことに、Cry j 1修飾リポソームはB細胞集団のうち、分化成熟の場として知られる胚中心に多く集積することが明らかとなった。以上の結果より、Cry j 1修飾リポソームはCry j 1特異的免疫細胞群への標的性を有することが示唆され、スギ花粉症根治療法確立への可能性が示された。

我一直在研究使用反向靶向DD（RT-DDS）开发过过敏和免疫疾病的基因疗法。在这项研究中，使用RT-DDS技术，将卵蛋白（OVA）用作siRNA递送的模型抗原，我们旨在建立一项基本研究，以开发一种制剂，并使用雪松花粉（CRY J1）应用于过敏疾病。由于siRNA递送载体，基于多阳化性脂质的聚阳性脂质体（PCL），使用磷酸二乙酰磷酸二乙酸 - 四乙基乙烯胺（DCP-TEPA）选择一种方法，其中脂质体具有阳性电荷，并经过负电荷并修饰了负电荷的siRNA。脂质衍生物PEG-甲酰亚胺被用作接头分子，以成功地将OVA修改为外脂质体膜。此外，该载体在体外表现出特定的OVA抗体结合能力，表明其作为选择性siRNA递送载体的潜力。还通过对OVA敏化小鼠的脾脏分析来提出其有用性。接下来，在使用siRNA建立基因疗法之前，我们将CRY J 1修改为DPPC/CHO = 2：1的脂质体，是一种一般的脂质体组成，以建立一种治疗方法。这项研究已经建立了一种从雪松花粉中有效提取和净化Cry J 1的方法，并揭示了Cry J 1修饰的脂质体具有具有CRY J 1特异性LGG1抗体的特异性和高结合性能。今年，我们使用Cedar Hay Fever模型小鼠进行了一个体内实验。研究了脾内详细的定位，并证实Cry J 1修饰的脂质体与脾内的B细胞群共定位，而未修饰的脂质体仅存在于它们周围。更有趣的是，已经揭示了Cry J 1修饰的脂质体在B细胞种群中积聚在生发中心（称为分化成熟的位置）中。以上结果表明，Cry J 1改性的脂质体具有CRY J 1特异性免疫细胞基团的靶标，表明有可能建立用于根雪松干草的治疗方法。