持続的な培地回収システムを用いた高機能エクソソームの探索と薬物送達への応用

使用连续培养基回收系统寻找高功能外泌体及其在药物递送中的应用

• 批准号: 22K19384
• 负责人: 小出 裕之
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19384/
• 关键词: エクソソーム; ナノ粒子; 取り込み; 薬物送達; mRNA; 脂質二重膜小胞

本研究ではエクソソームを分泌する親細胞として、発光酵素（N-luciferase (N-luc)）が遺伝子導入されたヒト前立腺がん（PC-3）細胞株を用いた。PC-3細胞を播種してから48時間連続培養後に回収した培地（コントロール）、培地循環装置を用いて細胞播種から2日間連続で回収した培地を精製し、エクソソームを得た。回収したエクソソームについて、動的光散乱法により粒子径を測定した。その結果、両システムにより精製したエクソソームの粒子径は300 nm以下であり、粒子径に差は見られなかった。ウェスタンブロット法によりエクソソームのマーカータンパク質であるCD63の発現を検討した結果、コントロールだけでなく、新システムにより回収したエクソソームにおいてもCD63タンパク質の発現が確認された。これらの結果より、回収した粒子がエクソソームであることが示唆された。また、回収したエクソソームのN-luc由来の発光量をレポーターアッセイにより測定した。その結果、発光量とCD63の発現量に相関があり、エクソソームがN-lucにより発光標識できていることが確認された。次に、エクソソームの細胞内への取り込み実験のために親細胞播種時の細胞数、受容細胞の播種数、エクソソームの添加量、受容細胞の種類を検討した。そして、決定した条件を元に両エクソソームをPC-3細胞へ添加し、その24時間後に細胞の発光強度を測定することで取り込み率を算出した。その結果、通常培養により回収したエクソソームと比較して、Day1、Day2いずれも細胞内への取り込み率が有意に増加していた。以上より、細胞培養中にエクソソームを持続的に回収することで、これまでとは異なる性質のエクソソームが回収可能であることが示唆された。

In this study, the cells were secreted by N-luciferase (N-luc) and light enzyme (N-luc). The cells were transformed into prestanding glands (PC-3). After 48 hours of incubation, the PC-3 cell returned to the cultivation ground after 48 hours of incubation, and the incubation equipment was used to return the seed to the incubator within 2 days, and the equipment was successful. The method of light dispersion was used to determine the diameter of particles. The results show that the diameter of the particles is less than 300 nm, and the diameter of the particles is different from that of the particles. This is the first time that the CD63 has been shown to show the results. This is the first time that the results have been detected. The new information has been returned to you. This is not the case. In this case, you have to make sure that you are aware of the error. The results show that the particles are instigated and the particles are not. The source of N-luc is the amount of light, the amount of light, the measurement of light. The results show that the light quantity is different from that of the CD63, and that the light quantity is different from that of the N-luc. The number of cells at the time of cell sowing, the number of species sown in tolerant cells, the amount of yeast added, and the number of cells in which they are allowed to be sown. It is necessary to determine the conditions for the addition of PC-3 cells and the determination of the light intensity of the cells after 24 hours. The data rate is calculated. The results are usually compared with those of Day1, Day2, and so on. The percentage of intracellular DNA acquisition is significantly higher than that of the control. In the above cell culture, you may be told that you may be abetted by the fact that you are in the process of receiving a sexual response.

项目成果

凍結融解による簡便なタンパク質内封リポソームの調製とタンパク質の細胞内送達への応用

冻融法简单制备包封蛋白质的脂质体及其在细胞内递送蛋白质中的应用

• 发表时间: 2022
• 作者: 平田真也;小出裕之;落合広樹;鈴木ひかる;出羽毅久;奥 直人;浅井知浩
• 通讯作者: 浅井知浩

脂凍結融解技術を駆使した核酸・タンパク質送達方法の開発

利用脂肪冻融技术开发核酸/蛋白质递送方法

• 发表时间: 2022
• 作者: 小出 裕之;米澤 正;出羽 毅久;奥 直人;浅井 知浩
• 通讯作者: 浅井 知浩

Increasing the siRNA knockdown efficiency of lipid nanoparticles by morphological transformation with the use of dihydrosphingomyelin as a helper lipid

使用二氢鞘磷脂作为辅助脂质通过形态转化提高脂质纳米颗粒的 siRNA 敲除效率

• DOI: 10.1039/d3bm00068k
• 发表时间: 2023
• 期刊: Biomaterials Science
• 影响因子: 6.6
• 作者: Hashimoto Masahiro;Yonezawa Sei;Furan Song;Nitta Chiori;Maeda Noriyuki;Tomita Koji;Yokouchi Ayano;Koide Hiroyuki;Asai Tomohiro
• 通讯作者: Asai Tomohiro

経口投与されたポリマーナノ粒子の体内動態に影響を与える因子の模索

探索影响口服聚合物纳米颗粒药代动力学的因素

• 发表时间: 2022
• 作者: 安野 豪;小出裕之;米澤 正;浅井知浩
• 通讯作者: 浅井知浩

消化管で標的分子を吸着する機能性ナノ粒子開発

开发吸附胃肠道目标分子的功能性纳米颗粒

• 发表时间: 2022
• 作者: Hirofumi Tomikawa;Yo Nagano;Kaneto Tsunemitsu;Mitsuhiro Terakawa;小出裕之
• 通讯作者: 小出裕之