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持続的な培地回収システムを用いた高機能エクソソームの探索と薬物送達への応用

使用连续培养基回收系统寻找高功能外泌体及其在药物递送中的应用

基本信息

批准号：
22K19384
负责人：
小出裕之
金额：
$ 4.16万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19384/
关键词：
エクソソームナノ粒子取り込み薬物送達 mRNA 脂質二重膜小胞

项目摘要

本研究ではエクソソームを分泌する親細胞として、発光酵素（N-luciferase (N-luc)）が遺伝子導入されたヒト前立腺がん（PC-3）細胞株を用いた。PC-3細胞を播種してから48時間連続培養後に回収した培地（コントロール）、培地循環装置を用いて細胞播種から2日間連続で回収した培地を精製し、エクソソームを得た。回収したエクソソームについて、動的光散乱法により粒子径を測定した。その結果、両システムにより精製したエクソソームの粒子径は300 nm以下であり、粒子径に差は見られなかった。ウェスタンブロット法によりエクソソームのマーカータンパク質であるCD63の発現を検討した結果、コントロールだけでなく、新システムにより回収したエクソソームにおいてもCD63タンパク質の発現が確認された。これらの結果より、回収した粒子がエクソソームであることが示唆された。また、回収したエクソソームのN-luc由来の発光量をレポーターアッセイにより測定した。その結果、発光量とCD63の発現量に相関があり、エクソソームがN-lucにより発光標識できていることが確認された。次に、エクソソームの細胞内への取り込み実験のために親細胞播種時の細胞数、受容細胞の播種数、エクソソームの添加量、受容細胞の種類を検討した。そして、決定した条件を元に両エクソソームをPC-3細胞へ添加し、その24時間後に細胞の発光強度を測定することで取り込み率を算出した。その結果、通常培養により回収したエクソソームと比較して、Day1、Day2いずれも細胞内への取り込み率が有意に増加していた。以上より、細胞培養中にエクソソームを持続的に回収することで、これまでとは異なる性質のエクソソームが回収可能であることが示唆された。

In this study, N-luciferase (N-luc) was introduced into the cell line PC-3. PC-3 cells were seeded for 48 hours and then cultured for 48 hours. The cells were seeded for 2 days and then cultured for 48 hours. The particle diameter measurement method is based on the dynamic optical scattering method. As a result, the particle diameter of the particle is below 300 nm, and the particle diameter difference is below 300 nm. The CD63 discovery results, the CD63 discovery results, and the CD63 discovery results are confirmed. The result of this is that the particles are very good. The amount of light emitted from the N-luc source was determined by the measurement of the amount of light emitted from the N-luc source. The results, the amount of light emitted and the amount of light emitted by CD63 are related to each other. The number of cells at the time of seeding, the number of cells seeded, the amount of cells added, and the type of cells were investigated. The light intensity of PC-3 cells was measured after 24 hours of incubation. The results were as follows: the rate of intracellular apoptosis was intentionally increased on Day1 and Day2. The above is a good example of how cell culture can be maintained.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

凍結融解による簡便なタンパク質内封リポソームの調製とタンパク質の細胞内送達への応用

冻融法简单制备包封蛋白质的脂质体及其在细胞内递送蛋白质中的应用

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
平田真也;小出裕之;落合広樹;鈴木ひかる;出羽毅久;奥直人;浅井知浩
通讯作者：
浅井知浩

脂凍結融解技術を駆使した核酸・タンパク質送達方法の開発

利用脂肪冻融技术开发核酸/蛋白质递送方法

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
小出裕之;米澤正;出羽毅久;奥直人;浅井知浩
通讯作者：
浅井知浩

Increasing the siRNA knockdown efficiency of lipid nanoparticles by morphological transformation with the use of dihydrosphingomyelin as a helper lipid

使用二氢鞘磷脂作为辅助脂质通过形态转化提高脂质纳米颗粒的 siRNA 敲除效率

DOI：
10.1039/d3bm00068k
发表时间：
2023
期刊：
Biomaterials Science
影响因子：
6.6
作者：
Hashimoto Masahiro;Yonezawa Sei;Furan Song;Nitta Chiori;Maeda Noriyuki;Tomita Koji;Yokouchi Ayano;Koide Hiroyuki;Asai Tomohiro
通讯作者：
Asai Tomohiro

消化管で標的分子を吸着する機能性ナノ粒子開発

开发吸附胃肠道目标分子的功能性纳米颗粒