個体レベルにおけるJNK型MAPK経路によるストレス応答シグナル伝達機構

JNK型MAPK通路在个体水平上的应激反应信号转导机制

• 批准号: 10J55252
• 负责人: 藤木 恒太
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J55252/
• 关键词: MAPK; 線虫JNK経路; 重金属ストレス応答; KGB-1; MLK-1; リン酸化; TPA-1; チロシンキナーゼ; SHC-1

線虫C.elegansにおいてMLK-1(MAPKKK)、MEK-1(MAPKK)、KGB-1(MAPK)経路は重金属ストレス応答に機能している。これまでに、重金属ストレス応答においてMLK-1は355番目のセリン残基(MLK-1S355)のリン酸化によりキナーゼ活性が制御されることが分かった。また、MLK-1の940番目のチロシン残基(MLK-1Y940)がリン酸化されることでMEK-1とMLK-1の複合体形成が制御されることもわかった。しかし、重金属ストレス応答においてこれらのリン酸化がどのように制御されているかは未だに不明である。そこで、MLK-1S355とMLK-1Y940のリン酸化するキナーゼの同定を試みた。MLK-1Y940をリン酸化するキナーゼの同定はfeeding RNAi法を用いて、チロシンキナーゼをコードする遺伝子を網羅的に機能阻害し、重金属感受性を指標に行ったが、同定することはできなかった。そこで、現在はKGB-1活性依存的に発現が上昇するレポーター遺伝子の発現量を指標にチロシンキナーゼのスクリーニングを行っている。一方、MLK-1S355をリン酸化するキナーゼについても解析した。MLK-1S355の配列に注目したところ、キナーゼであるPKCの認識配列と一致したことから、PKCがMLK-1S355をリン酸化するのではないかと考え解析した。その結果、PKCホモログであるTPA-1がMLK-1S355をリン酸化することがわかった。これらの結果から、TPA-1がMLK-1S355のリン酸化を介して重金属ストレス応答を制御することが示唆された。今後は、TPA-1の上流でどのような因子が機能するか検討する予定である。

MLK-1（MAPKK），MEK-1（MAPKK）和KGB-1（MAPK）途径在线虫C.秀丽隐杆线虫中的重金属应力响应中起作用。迄今为止，已经发现在重金属应力响应中，MLK-1受到位置355（MLK-1S355）丝氨酸残基的磷酸化调节。还发现，MLK-1（MLK-1Y940）位置在940位置的酪氨酸残基的磷酸化调节MEK-1和MLK-1之间的复合物的形成。但是，在重金属应力反应中如何调节这些磷酸化尚待观察。因此，我们试图鉴定磷酸化MLK-1S355和MLK-1Y940的激酶。使用喂养RNAi方法鉴定了MLK-1Y940的激酶磷酸化，以全面抑制编码酪氨酸激酶的基因的功能，并使用重金属敏感性作为指示剂确定，但无法识别它。因此，我们目前正在使用记者基因的表达水平筛选酪氨酸激酶，其表达以KGB-1活性依赖性方式增加。另一方面，还分析了磷酸化MLK-1S355的激酶。当我们专注于MLK-1S355的序列时，我们分析了结果，因为它与激酶PKC的识别顺序一致，我们认为PKC可能会磷酸化MLK-1S355。结果，发现PKC同源物TPA-1磷酸化MLK-1S355。这些结果表明，TPA-1通过MLK-1S355的磷酸化调节重金属应力反应。将来，我们计划考虑哪些因素将在TPA-1的上游起作用。

项目成果

重金属ストレス応答におけるMLK-1 MAPKKKの上流因子の解析

MLK-1 MAPKKK重金属胁迫反应上游因素分析

• 发表时间: 2011
• 作者: Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;Leonardo Bautista Gomez;藤木恒太
• 通讯作者: 藤木恒太