Development and application of a novel technique that allows analysis on the gene expression of a single cell.

开发和应用一种新技术，可以分析单个细胞的基因表达。

• 批准号: 21651085
• 负责人: NOJIMA Hiroshi
• 金额: $ 2.16万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21651085/
• 关键词: PCR; Chum-RNA; 線形増幅; mRNA増幅; センス鎖; DNAマイクロアレイ; 極微量; リアルタイムPCR

Preparation of high-quality cDNA is needed for functional analysis of gene function. However, reverse transcription PCR, an exponential amplification method causes a bias to majority of RNA molecules, because the reaction rate of enzymatic reaction depends on the concentration of the substrates. We developed a novel method for amplification of ultralow amount RNA by addition of dummy substrate RNA(Chum-RNA) into in vitro transcription and RT reaction system. Chum-RNA increases virtual concentration of substrate in the system, and the enzymes can catalyze the reaction for a very small number of RNA molecules. This novel technology enabled us to construct a high-quality cDNA library which reflects the original distribution of mRNA molecules from a single cell amount of RNA. Here, we report that this technology can be applied to Microarray analysis and Real time PCR method.

基因功能分析需要高质量cDNA的制备。然而，逆转录PCR，一种指数扩增方法，会导致对大多数RNA分子的偏倚，因为酶促反应的反应速率取决于底物的浓度。我们在体外转录和RT反应体系中加入虚拟底物RNA（Chum-RNA），建立了一种扩增超低量RNA的新方法。Chum-RNA增加了系统中底物的实际浓度，并且酶可以催化非常少量的RNA分子的反应。这项新技术使我们能够构建一个高质量的cDNA文库，该文库反映了来自单细胞量RNA的mRNA分子的原始分布。在此，我们报道该技术可应用于微阵列分析和真实的时间PCR方法。

项目成果

A novel Diagnostic markers for Takayasu Arteritis obtained by Genopal TM focused microarray based on Spearman rank correlation

基于 Spearman 等级相关性的 Genopal TM 聚焦微阵列获得的新的大动脉炎诊断标志物

• 发表时间: 2010
• 作者: 奥崎大介;野島博
• 通讯作者: 野島博

A novel Diagnostic markers for Takayasu Arteritis obtained by Genopal focused microarray based on Spearman rank correlation.

基于 Spearman 等级相关性，通过 Genopal 聚焦微阵列获得的一种新的大动脉炎诊断标志物。

• 发表时间: 2010
• 作者: A. Ohtaka;et. al.;奥崎大介;奥崎大介;奥崎大介;奥崎大介;奥崎大介;奥崎大介;奥崎大介
• 通讯作者: 奥崎大介

全身性エリテマトーデス患者血液細胞で発現亢進している遺伝子群、およびその利用

系统性红斑狼疮患者血细胞上调基因及其利用

• 发表时间: 2010

Genopal^<TM>: a novel hollow fiber array for focused microarray analysis

Genopal^<TM>：一种用于聚焦微阵列分析的新型中空纤维阵列

• 发表时间: 2010
• 期刊: DN A Res
• 作者: Okuzaki D;Fukushima T;Tougan T;Ishii T.;Kobayashi S;Yoshizaki K;Akita T;and Nojima H
• 通讯作者: and Nojima H

Genopal TM : a novel hollow fiber array for focused microarray analysis.

Genopal TM ：一种用于聚焦微阵列分析的新型中空纤维阵列。

• 发表时间: 2010
• 期刊: DNA Res.
• 作者: Okuzaki D;Fukushima T;Tougan T;Ishii T.;Kobayashi S;Yoshizaki K;Akita T;Nojima H.
• 通讯作者: Nojima H.