Cloning and functional analusis of cell-cycle regulatory genes by complementation cloning.
通过互补克隆进行细胞周期调控基因的克隆和功能分析。
基本信息
- 批准号:05454647
- 负责人:
- 金额:$ 4.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
- 财政年份:1993
- 资助国家:日本
- 起止时间:1993 至 1995
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
By west-western hybridization using an anti-cyclin G antibody, we cloned a cDNA encoding a novel association partner of cyclin G.The cDNA encodes a protein harboring a predicted N-terminal Ser/Thr protein kinase catalytic domain with a long C-terminal extension.Hence we named it GAK (cyclin G-associated kinase) . The C-terminal extension shares homology with tensin and auxilin, and contains a leucine zipper. By coimmunoprecipitation and western blotting, we detected and association between GAK and cyclin G in NRK cell extracts, and in extracts of COS cells expressing myc-tagged cyclin G.GAK was also found to coprecipitate with CDK5 and actin, and CDK5 is shown to be associated with cyclin G in NRK extracts. A direct interaction between GAK and cyclin G was detected using immobilized GST-GK and recombinant GST-free cyclin G for BIAcore analysis. Recombinant and immunoprecipitated GAK were found to have kinase activity towards histone H1, but this activity was not enhanced (or decreased) by the presence of cyclin G.In contrast to brain specific expression of auxilin, GAK was found to be ubiquitously expressed. In HeLa cells synchronized from S phase by the thymidine double block, RNA and protein levels of GAK and cyclin G oscillated, peaking at G1 phase, and they showed a similar pattern of oscillation. These results suggest that GAK is somehow involved in cell cycle regulation, forming a complex with cyclin G.
利用抗细胞周期蛋白G抗体的东西杂交技术,我们克隆了一个编码细胞周期蛋白G新结合伴侣的cDNA,该cDNA编码一个具有预测的n端丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域的蛋白,该蛋白具有长c端延伸。因此我们将其命名为GAK (cyclin G-associated kinase)。c端延伸与张力素和辅助素具有同源性,并包含亮氨酸拉链。通过共免疫沉淀和western blotting,我们在NRK细胞提取物中检测到GAK和cyclin G之间的关联,在表达myc标记的cyclin G的COS细胞提取物中,GAK还与CDK5和actin共沉淀,并且在NRK提取物中CDK5被证明与cyclin G相关。利用固定化GST-GK和重组GST-free cyclin G检测GAK和cyclin G之间的直接相互作用,并进行BIAcore分析。重组和免疫沉淀GAK被发现对组蛋白H1具有激酶活性,但这种活性不因细胞周期蛋白g的存在而增强(或降低)。与auxilin的脑特异性表达相反,GAK被发现普遍表达。在由胸腺嘧啶双阻断同步的S期HeLa细胞中,GAK和cyclin G的RNA和蛋白质水平振荡,在G1期达到峰值,它们表现出类似的振荡模式。这些结果表明GAK以某种方式参与细胞周期调节,与细胞周期蛋白G形成复合物。
项目成果
期刊论文数量(38)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Shimizu, M., Ichikawa, E., Inoue, U., Nakamura, T.Nakajima, T., Nojima.H., Okayama, H., Oda, K.: "The G1/S boundary-specific enhancer of the Rat cdc2 promotor." Mol.Cell.Biol.15 (5). 2882-2892 (1995)
Shimizu, M.、Ichikawa, E.、Inoue, U.、Nakamura、T.Nakajima, T.、Nojima.H.、Okayama, H.、Oda, K.:“G1/S 边界特异性增强子
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- 通讯作者:
Kitagawa K,Wang X,Hatada I,Yamaoka T,Nojima H,Inazawa J,Abe T,Mituya K,Oshimura M,Murata A,Monden M,Mukai T: "Isolation and maping of human homologues of and imprinted mouse gene U2af1-rs1." GENOMICS. 30. 257-263 (1995)
Kitakawa K,Wang X,Hatada I,Yamaoka T,Nojima H,Inazawa J,Abe T,Mituya K,Oshimura M,Murata A,Monden M,Mukai T:“人类同源物和印记小鼠基因 U2af1- 的分离和定位
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- 影响因子:0
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- 通讯作者:
Kitagawa K.,et al.: "Isolation and mapping of human homologues of an imprinted mouse gene U2af1-rs1." GENOMICS. 30. 257-263 (1995)
Kitakawa K.,et al.:“印记小鼠基因 U2af1-rs1 的人类同源物的分离和定位。”
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Sugiyama,A.et al: "A zinc finger protein controls the onset of premeiotic DNA synthesis of fission yeast in a Mei2-independent cascade." EMBO J.13. 1881-1887 (1994)
Sugiyama, A. 等人:“锌指蛋白在不依赖 Mei2 的级联中控制裂殖酵母减数分裂前 DNA 合成的开始。”
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Hara E,Yamaguchi T,Nojima H,..., & Oda K.: "Id-related genes encoding helix-loop-helix proteins are required for G1 progression and are repressed in senescent human...." Journal of Biological Chemistry. 269. 2139-2145 (1993)
原E、山口T、野岛H、...、
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$ 4.22万 - 项目类别:
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$ 4.22万 - 项目类别:
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$ 4.22万 - 项目类别:
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