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トキシコゲノミクスによる新規機能性ナノ高分子(デンドリマー)の毒性評価

使用毒物基因组学评估新型功能纳米聚合物（树枝状聚合物）的毒性

基本信息

批准号：
21656129
负责人：
岡部聡
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

PAMAM(polyamidoamine)デンドリマーの生物学的活性は世代が大きくなる程高くなるため、毒性は世代に強く依存すると考えられる。世代依存毒性を含むPAMAMデンドリマーの毒性のより詳細な解明が必須であり、本研究ではPAMAMデンドリマーの毒性及びその発現メカニズムの解明を目的とした。ヒト肝癌由来細胞株HepG2細胞を用いて、PAMAMデンドリマーG4-G7の毒性評価を行った。全ての試験通して、PAMAMデンドリマーとBSAの相互作用による影響を除く為、PAMAMデンドリマーの溶媒にHBSS(Hank's balanced salt solution)にHEPESを10mMとなるように加えたものを用いた。また、暴露濃度にはNeutral red(NR)assayで細胞生存率が80%となる濃度をそれぞれ用いた。その結果、PAMAMデンドリマーの世代依存的な細胞毒性を確認した。同じNR assayで細胞生存率が80%となる濃度でも、世代の大きいPAMAMデンドリマーほどROSの産生能が高いことが明らかとなった。ROS産生は120minで最高値をとった。さらに、DNA損傷性を評価するために、H_2O_2をPositive Controlとしてコメットアッセイを行った。実験結果の解析は、尾の長さ、面積、濃さにより、尾の無いもの(I)から,核内のDNA全てが断片化した頭部の無いものあるいは頭部の極微少なもの(V)までI～Vの5段階に分けて評価した。その結果、AMAMデンドリマーで処理していないHBSS(negative control)の細胞群では、クラスIが大部分であった(75.2%)のに対し、PAMAMデンドリマー暴露系ではクラスIが40%～55%と低く、G7で最低値の40.4%%となった。また、G6,G7では損傷の重篤であるIV,Vの割合が高く、コメット値はG5を除いて世代が増加するに従い、増加する傾向が認められた。以上の結果より、PAMAMデンドリマーがDNA損傷性を有しており、DNA損傷の程度は世代が大きい程より重篤であることが明らかとなった。また、1mM H_2O_2とPAMAMデンドリマーG6はROS産生量がほぼ同程度であったにも関わらず、DNA損傷レベルはH_2O_2の方がPAMAMデンドリマーに比べかなり高い値となった。このことから、酸化ストレスがPAMAMデンドリマーの毒性の直接的な原因ではない可能性が示唆された。

The biological activity of PAMAM (polyamidoamine) is known to be highly dependent from generation to generation and from generation to generation. The generation-dependent toxicity test includes the PAMAM toxicity test, the generation dependent toxicity test, the generation dependent toxicity The cell line HepG2 of the origin of hepatoma was tested with PAMAM, PAMAM, and G4-G7 toxicity. Full-text communication, PAMAM communication, BSA interaction, PAMAM communication, HBSS, Hank's balanced salt solution, HEPES, 10mM, interaction, and so on. The cell survival rate of Neutral red (NR) assay was 80%. The results showed that PAMAM was responsible for the confirmation of generation-dependent cytotoxicity. The same as the NR assay, the cell survival rate is 80%, the cell survival rate is 80%. ROS has the highest birth rate of 120min. Please tell me what to do, the DNA will tell you what to do, and the Positive Control will tell you that you will not be able to do so. The results show that there is no significant difference in the results of the analysis, the tail length, the face length, the tail length, the tail length, The results showed that the AMAM (negative control) cell population, the majority of the cells (75.2%), the exposure system (40%), the G7 (40.4%) and the G7 (40.4%) were significantly higher than those of the control group. G6, G6, G7, IV,V, G5, G6, G6, G7, G7, G6, G6, G7, G7, G6, G6, G7, G6, The results of the above results show that there are significant differences between PAMAM and DNA in terms of the severity of the disease and the degree of DNA. 1mM H_2O_2, 1mM H_2O_2, PAMAM, ROS, growth, growth and growth. The direct "cause", "possibility", "possibility", "cause", "possibility", direct "cause", "possibility", "possibility".