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Aβペプチド捕獲型アルブミン製剤の開発とアルツハイマー病治療への応用

Aβ肽捕获白蛋白制剂的研制及其在阿尔茨海默病治疗中的应用

基本信息

批准号：
21659042
负责人：
小田切優樹
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Sojo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659042/
关键词：
ヒト血清アルブミン Aβ 変異体ファージドメイン Pichia酵母免疫沈降法

项目摘要

本年度はAβによる毒性の軽減や繊維化の抑制を可能とするAβ高捕獲型ヒト血清アルブミン(HSA)変異体の設計を最終目標とした。はじめに、HSA分子上のAβ結合部位のマッピングを行った。HSAが相同性の高い3つのdomainと6つのsub-domainから成り立つ点に着目し、domain I (dI)、domain III (d III)、domain IA-IIA (d IA-IIA)、domain IIB-III (d IIB-III)を提示した各display phageを作製した。次に、phageに提示したHSA-domainとAβの結合評価法についてELISA法での確立を行った。具体的には、HSA d IIB-IIIを提示したdisplay phageを作製し、helper phage(タンパク質非提示phage)をコントロールとした結合評価をELISAによって行った。その結果、helper phageと比較してHSA d IIB-III display phageとAβの強い結合が確認されたことから、phage上にdomainを提示させることで、各HSA-domainとAβとの結合評価が可能であると考えられた。そこで、dII、dIIB-IIIの2種に加え、今回新たに作成した3種のdisplay phageのタンパク質提示確認をELISAによって行った。その結果、すべてのdisplay phageにおいて抗HSA抗体に対する反応性がみられたことより、全てのHSA-domainが各phage上に提示していると考えられた。さらに、各domalnを提示したphageとAβとの結合実験から、AβはHSA分子上の全てのdomainに結合することが示唆された。

This year, the A β high-trapping serum albumin (HSA) system design is the most sensitive for this year's A β toxicity test. The binding sites of A β on the HSA molecule and the A β binding site of the DNA molecule were isolated and purified. HSA homology 3, domain 6, sub-domain, domain I (dI), domain III (d III), domain IA-IIA (d IA-IIA), domain IIB-III (d IIB-III) prompt each display phage to act as a target. For the second time, phage prompts you to HSA-domain A β in combination with the ELISA method to make sure that the line is established. The specific information, HSA d IIB-III, prompts you to use display phage as a hint, and helper phage (you are not prompted to prompt phage) to combine the information in ELISA. The results of the test, the results of the helper phage comparison, the combination of the HSA d IIB-III display phage A β and the confirmation of the phage, the prompt of the domain on the phage, and the combination of the various HSA-domain A β tests may have a significant impact on the performance. This time, you will be prompted to confirm that you will be prompted to confirm that you are using dII, dII, dIIB-III, and so on. This time, you will be prompted to confirm that you will not be able to do so. This time, you will be prompted to confirm that you will not be able to do so. The results, anti-HSA antibodies, anti-HIV antibodies, anti-HSA antibodies, anti-HIV antibodies, anti- The combination of phage, A β, and domain on the A β HSA molecule and the whole domain on the A β DNA molecule were prompted to indicate the instigation of the disease.