Isolation and characterisation of genes encoding plasmodesmal proteins

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Ziel des vorliegenden Antrages ist die Identifizierung und Charakterisierung plasmodesmaler Proteine der Modellpflanze Arabidopsis thaliana. Hierzu sollen drei Strategien verfolgt werden. In früheren Untersuchungen konnte gezeigt werden, dass transgene A. thaliana-Pflanzen, die ein Fusionsprotein bestehend aus dem viralen Transportprotein MP17 und GFP (MP17GFP) exprimieren, durch einen verminderten Wuchs und eine Fluoreszenzmarkierung ihrer Plasmodesmen gekennzeichnet sind. Unter Ausnutzung dieser Eigenschaften sollen (i) eine EMS-mutagenisierte Population MP17:GFP exprimierender A. thaliana-Pflanzen auf veränderte Bindungseigenschaften untersucht und (ii) ein biochemisches Verfahren zur Reinigung von Plasmodesmen mit anschließender Charakterisierung gebundener Proteine mittels ESI-MS/MS etabliert werden. Hierdurch erhoffen wir, Mutanten mit veränderten Plasmodesmen sowie Sequenzinformationen zu plasmodesmalen Proteinen zu erhalten. In einem weiteren Ansatz sollen temparatursensitive Stärke akkumulierende A. thaliana-Mutanten aus einer EMS-mutagenisierten Population isoliert und charakterisiert werden. Neben einer Vielzahl von Stoffwechselgenen erwarten wir Mutationen, die zu einer Blockierung des Assimilatexportes führen. Letztere sollen untersucht werden.