ストレス応答におけるPGAM5による選択的スプライシング制御機構

PGAM5在应激反应中的选择性剪接控制机制

• 批准号: 22790059
• 负责人: 渡辺 順子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22790059/
• 关键词: ストレス応答; ホスファターゼ; スプライシング

PGAM5は、ヒスチジン残基を活性中心とする全く新しいタイプのセリン・スレオニン特異的ホスファターゼとして機能する。さらに分子N末端側に存在する膜貫通ドメインを介しておもにミトコンドリアに局在することが報告されている。しかし、ミトコンドリア内でのPGAM5の局在は詳細には解析されていなかったため、本研究においてその詳細を検討した。単離ミトコンドリアを用いたプロテアーゼに対する感受性アッセイや、ミトコンドリア膜画分のショ糖密度勾配遠心分離によるさらなる分画実験により、PGAM5はおもにミトコンドリア内膜に局在することが明らかとなった。一方で我々は、ミトコンドリアの膜電位低下にともなってPGAM5はそのN末端が切断されることを示唆するデータを得ていた。今回、切断型PGAM5のN末端アミノ酸配列をエドマン分解法によって解析したところ、切断部位が膜貫通ドメイン内に存在すること、すなわち膜内切断を受けることが示唆された。さらに切断部位の確認と切断型分子の局在を検討することを目的に、切断によって露出するアミノ酸配列を抗原とした断端認識抗体を作製した。その結果、ミトコンドリアの膜電位低下にともなって確かに膜貫通ドメイン内でPGAM5が切断されることが確認された。現在、PGAM5によるスプライシング制御においても、この分子内切断が重要な役割を担っているものと予想し、断端認識抗体を用いた切断型分子の局在を検討するとともに、切断制御機構の解析を進めている。

PGAM5 は, ヒ ス チ ジ ン residues を active center と す る く all new し い タ イ プ の セ リ ン · ス レ オ ニ ン specific ホ ス フ ァ タ ー ゼ と し て function す る. さ ら N terminal side に に molecules exist す る transmembrane ド メ イ ン を interface し て お も に ミ ト コ ン ド リ ア に bureau in す る こ と が report さ れ て い る. し か し, ミ ト コ ン ド リ ア within で の PGAM5 の bureau in は detailed に は parsing さ れ て い な か っ た た め, this study に お い て そ の detailed を beg し 検 た. 単 from ミ ト コ ン ド リ ア を with い た プ ロ テ ア ー ゼ に す seaborne る susceptibility ア ッ セ イ や, ミ ト コ ン ド リ ア membrane draw points の シ ョ sugar density hook with telecentric separation に よ る さ ら な る points painting be 験 に よ り, PGAM5 は お も に ミ ト コ ン ド リ ア lining に bureau in す る こ と が Ming ら か と な っ た. One で me 々 は, ミ ト コ ン ド リ ア の membrane potential low に と も な っ て PGAM5 は そ の N terminal が cut さ れ る こ と を in stopping す る デ ー タ を must て い た. Today back, cutting off PGAM5 の N terminal ア ミ ノ acid with column を エ ド マ ン decomposition method に よ っ て parsing し た と こ ろ, cut parts が transmembrane ド メ イ ン に exist within す る こ と, す な わ ち membrane is cut off を by け る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に cut の confirm と cut type molecular の bureau in を beg す 検 る こ と を purpose に, cut off に よ っ て reveal す る ア ミ ノ acid with column を antigen と し た し the cut ends meet antibody を cropping た. そ の results, ミ ト コ ン ド リ ア の membrane potential low に と も な っ て か indeed に transmembrane ド メ イ ン within で PGAM5 が cut さ れ る こ と が confirm さ れ た. Now, PGAM5 に よ る ス プ ラ イ シ ン グ suppression に お い て も, こ の intramolecular cut cut を bear important な が service っ て い る も の と to think し, end know antibody を with い た cut type molecular の bureau in を beg す 検 る と と も に, cut off the royal institution の parsing を into め て い る.

项目成果

Mitochondrial Membrane Potential Loss Induces Intramembrane Proteolysis of the Mitochondria-Resident Protein Phosphatase PGAM5

线粒体膜电位损失诱导线粒体驻留蛋白磷酸酶 PGAM5 的膜内蛋白水解

• 发表时间: 2011
• 作者: Takeda K;et.al.;Shiori Murakami
• 通讯作者: Shiori Murakami