大腸菌の走化性における膜外から膜内へのシグナル伝達機構の構造生物学的解明

大肠杆菌趋化过程中从膜外到膜内信号转导机制的结构生物学阐明

基本信息

  • 批准号:
    11J11124
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2011
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2011 至 2013
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

研究では、大腸菌走化性分子複合体の結合様式を、各構成蛋白質が正しい全体構造を保持した状態にて、溶液NMR法による構造生物学的解析を行うことにより、膜外から膜内のエフェクター分子にシグナルが伝達される機構を解明することを目的とする。昨年度までに、区分安定同位体標識法を利用して、全長CheAとCheYの相互作用をNMR法により調べた結果、CheAの活性ドメインであるP1ドメインとCheYは、全長ではじめて両者の活性部位同士が直接結合すること、およびその結合が平衡状態にあることを明らかとした。今年度は、上述のP1ドメインとCheYの結合およびその平衡の生物学的な意義について調べるため、変異体を用いた解析を行った。CheY上のP1ドメインとの結合界面上に位置する残基に変異を導入し、CheAとの親和性をITC実験により調べたところ、I20A変異体は、P2ドメイン単独との解離定数は野生型と同等であるが、CheA全長との親和性が低下することが示された。さらに、CheAに対して等量添加して、NMRスペクトルを取得したところ、野生型CheYを添加した際に観測された化学シフト変化が抑制されていた。したがって、120A変異体は、P1ドメインに対する親和性が低下していることが示された。さらに、Phos-tag SDS-PAGE解析を行ったところ、I20A変異体ではリン酸化CheYの生成量が低下していた。以上の結果に基づき、P1ドメインとCheYの結合が平衡状態にあることによって、P1ドメインはCheYだけでなく、ATP結合ドメインであるP4ドメインとも反応し、リン酸をP4ドメインからCheYへと効率的に受け渡すことを可能にしてやると考えた。このような結合様式は、一般に弱い相互作用ネットワークを形成する、シグナル伝達1分子複合体の相互作用様式を解明する上でも重要な知見を与えると考えた。
To study the binding formula of E. coli chemotropic molecular complex, the structural integrity of each component protein, the structural biology analysis by solution NMR, the mechanism of molecular integration between outer membrane and inner membrane. The interaction between CheA and CheY was investigated by NMR. The results showed that the active site of CheA and CheY was directly bound to the active site of CheA and CheY. This year, the above-mentioned P1 and Chey are combined with the biological significance of the balance. The residues on the binding interface of P1 and P2 are different from each other, and the affinity of P1 and P2 is different from that of P2 and P2. In addition, the chemical composition of the protein was determined by NMR. 120A, 120B, 120C, 120C In addition, Phos-tag SDS-PAGE analysis showed that the production of I20A was low. The above results show that the combination of P1 and Chey is in equilibrium, and the combination of P1 and Chey is in equilibrium. The combination of ATP and Chey is in equilibrium. The combination of P4 and Chey is in equilibrium. The combination of P4 and Chey is in equilibrium. A study on the interaction between molecular complexes and their binding mechanisms

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Segmental isotopic labeling of a 140 kDa dimeric multi-domain protein CheA from Escherichia coli by expressed protein ligation and protein trans-splicing.
  • DOI:
    10.1007/s10858-012-9628-3
  • 发表时间:
    2012-07
  • 期刊:
  • 影响因子:
    2.7
  • 作者:
    Minato Y;Ueda T;Machiyama A;Shimada I;Iwaï H
  • 通讯作者:
    Iwaï H
Alternate Signal Transduction Mechanism of CheA and CheY revealed by NMR
NMR 揭示 CheA 和 CheY 的替代信号转导机制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2013
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Minato Y;Ueda T;Machiyama A;Iwai H;Shimada l
  • 通讯作者:
    Shimada l
区分標識法によるマルチドメインタンパク質のNMR解析
使用区室标记方法对多结构域蛋白质进行 NMR 分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2012
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    湊雄一;上田卓見;町山麻子;嶋田一夫;岩井秀夫
  • 通讯作者:
    岩井秀夫
P2X_4受容体の開閉制御機構の解明
阐明P2X_4受体的打开/关闭控制机制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2014
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    湊 雄一;鈴木 志歩;幸福 裕;上田 卓見;服部 素之;濡木 理;嶋田 一夫
  • 通讯作者:
    嶋田 一夫
Structural Elucidation of the Alternae Signal Tansduction Mechanism of CheA and CheY
CheA 和 CheY 交替信号传导机制的结构阐明
  • DOI:
  • 发表时间:
    2012
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Minato Y;Ueda T;Machiyama A;Iwai H;Shimada I
  • 通讯作者:
    Shimada I
{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ patent.updateTime }}

湊 雄一其他文献

湊 雄一的其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

相似海外基金

細胞内核磁気共鳴法を用いたin situ環境下でのRac1の動的構造制御機構の解明
利用细胞内核磁共振原位阐明 Rac1 的动态结构控制机制
  • 批准号:
    24K18077
  • 财政年份:
    2024
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
核磁気共鳴法を用いたGタンパク質共役型受容体によるシグナル制御機構の解明
利用核磁共振阐明 G 蛋白偶联受体的信号控制机制
  • 批准号:
    23K21289
  • 财政年份:
    2024
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
核磁気共鳴法を用いたGタンパク質共役型受容体によるアレスチン活性化機構の解明
使用核磁共振阐明 G 蛋白偶联受体的抑制蛋白激活机制
  • 批准号:
    22K15052
  • 财政年份:
    2022
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
スピントロニクスを利用した革新的核磁気共鳴法の開拓
利用自旋电子学开发创新核磁共振方法
  • 批准号:
    22K18686
  • 财政年份:
    2022
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
核磁気共鳴法を用いたGタンパク質共役型受容体によるシグナル制御機構の解明
利用核磁共振阐明 G 蛋白偶联受体的信号控制机制
  • 批准号:
    21H02410
  • 财政年份:
    2021
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
動的核偏極‐核磁気共鳴法による新規心筋梗塞診断法の開発
动态核极化-核磁共振诊断心肌梗死新方法的开发
  • 批准号:
    12J06035
  • 财政年份:
    2012
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
The development of a new nuclear magnetic resonance method using ballistic conductance and the detection of a small amount of molecules
利用弹道电导开发新的核磁共振方法并检测少量分子
  • 批准号:
    23654152
  • 财政年份:
    2011
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
核磁気共鳴法を用いた層状超伝導体の超伝導対称性の同定およびその発現機構の解明
利用核磁共振识别层状超导体中的超导对称性并阐明其表达机制
  • 批准号:
    08J00851
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
精密角度分解核磁気共鳴法を用いた圧力誘起相転移の研究
利用精密角分辨核磁共振方法研究压力诱导相变
  • 批准号:
    08J07419
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
核磁気共鳴法によるナノメートル領域に孤立した反強磁性三角スピンの量子揺動の研究
核磁共振方法研究纳米区反铁磁三角自旋的量子涨落
  • 批准号:
    20540328
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 1.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
{{ showInfoDetail.title }}

作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了