食品レベルの過剰鉄で誘発される貧血ラットに特有な鉄の即時的吸収抑制の解明

阐明食物中过量铁引起的贫血大鼠特有的铁吸收立即抑制作用

• 批准号: 22650182
• 负责人: 篠田 粧子
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22650182/
• 关键词: 鉄; 腸管吸収; 非ヘム鉄輸送体

貧血時に高濃度の鉄を投与すると、短時間でその吸収が抑制された現象について、小腸粘膜細胞膜上における輸送体タンパク質DMT1の構造変化、特に内在化とリン酸化による活性変化をターゲットとして、研究を遂行している。DMT1タンパク質は電気泳動で推定分子量(62kD)よりも低い位置(45～52kD)に出現する性質がある。唯一入手可能であったラットDMT1抗体を海外から取り寄せてウェスタンブロッティングで単一バンドを確認したものの、業者に作成を依頼したラットDMT1抗体で検出したバンドの分子量とは異なっていた。各抗体の特異性を検証するために、メンブレン上で抗体が結合したタンパク質のN末端のアミノ酸配列を解析することを試みたが、解析に充分量のタンパク質を回収することが出来なかった。そこで、大腸菌にDMT1タンパク質を発現させ、DMT1のポジティブコントロールを得ることを試みている。貧血ラット小腸粘膜から抽出したtotal RNAからDMT1の全長鎖cDNAを作成し、competent cells ; XL1 blueを用いて形質転換した。得られたDMT1遺伝子の配列は1塩基異なったが、アミノ酸の配列は既報と一致した。DMT1タンパク質の充分な発現が確認できないため、温度条件およびIPTG濃度(遺伝子の発現を誘導)について検討を加えている。抗体の特異性が検証できていないため、DMT1の内在化およびリン酸化については実験が進んでいない。しかし、信頼性の高い抗体を得ることは確実に本研究の成果に繋がることから、引き続きDMT1タンパク質のポジティブコントロール合成に取り組む。

The study was carried out on the structural transformation, special internalization, acidification and activity change of the transporter DMT1 on the cell membrane of the small intestine mucosa. DMT1 is the putative molecular weight (62kD) of the electrokinetic mass, and appears in the lower position (45~52kD). The only way to start is to confirm the molecular weight of DMT1 antibody overseas. The specificity of each antibody is demonstrated by the binding of the antibody to the N-terminal amino acid sequence of the antibody. DMT1 is the most common type of bacteria in the world, and DMT1 is the most common type. The total RNA extracted from the small intestine mucosa of anemia was used to construct the full-length cDNA of DMT1, and the XL1 blue was used to transform the DNA. The result is that DMT1 is the same as DMT 1. DMT1 is the most important component of IPTG. It can be confirmed that DMT 1 is the most important component of IPTG. Specificity of antibody detection, internalization and acidification of DMT1 The results of this study are summarized as follows: (1) The structure of DMT1 protein is determined by molecular weight analysis and molecular weight analysis.