再生医療のための新世代多層培養法の開発‐網膜再生・移植にむけて‐

开发新一代再生医学多层培养方法 - 用于视网膜再生和移植 -

• 批准号: 22659314
• 负责人: 石川 博
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The Nippon Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22659314/
• 关键词: 網膜再構築; コラーゲンビーズ法; マウスES細胞; 胚子様構造体; 眼球原基; ロドプシン含有細胞; ETFs; 還流培養

網膜は脳から発生する発生する器官で、3層の神経細胞層(視神経細胞層、双極細胞層、杆状体・錐状体細胞層)と1層の色素上皮層の計4層からなる。通常の培養法ではそれぞれ異なった機能を持つ細胞をシナプス接合させ4層に重ねることは出来ない。本研究では培養下でそれぞれ増殖させた各細胞をコラーゲンビーズ培養法により4層に重ね、神経細胞層の3層をシナプス接合させ網膜を再構築する新しい培養法を試みた。まずマウス由来のES細胞(EES-6)から懸濁培養法により胚様体を作成し、ETFs添加培養液を用いて、還流培養しこれを成育させた。約10mmの大きさに育った胚子様構造体から眼球原基(網膜原基)を実体顕微鏡下に取り出し、ここから網膜を構成する4種の細胞(視神経細胞層、双極細胞層、杆状体・錐状体細胞層、メラニン細胞)を分離し、それぞれ2倍体性の高い細胞株を樹立した。次に単層のメラニン細胞の上に大きさの異なるコラーゲンビーズ(50,100,200μm)に各神経細胞を付着させたものを順次重ねて、4層構造を持つ網膜様構造物を作製できた。ロドプシン含有細胞(杆状体・錐状体細胞層)と双極神経細胞は色素上皮層に対し垂直に配列している所と配列が乱れている所があった。最上層は大型の神経細胞が多く存在していた。光刺激による誘発応答が確認出来たので3層の神経細胞はシナプス接合していることが判明した。網膜内各層の異なる細胞密度をビーズの大きさの違いで得られると考えたが、ごく少数とはいえメラニン細胞の各層への遊走を阻止する事が出来なかった。発生時は網膜内腔があるためメラニン細胞の遊走は阻止されるものと思われる。今後、生体の網膜のようなきれいな細胞配列を得るため、ビーズの形と大きさのさらなる検討とビーズの溶解速度の調節、さらにそれぞれの細胞層を構成する細胞の極性を統一させる新しい工夫が必要である。

The omentum する 脳 ら ら develops する develops する organs で, three layers of neurotic cells (neurotic cell layer, bipolar cell layer, rod and cone cell layer)と, one layer of the pigment epithelium layer, four layers of と らなる. Usually の culture method で は そ れ ぞ れ different な っ た function を hold つ cells を シ ナ プ ス joint さ せ 4 layer に heavy ね る こ と は out な い. Under this study で は cultivate で そ れ ぞ れ raised colonization さ せ た each cell を コ ラ ー ゲ ン ビ ー ズ culture method に よ り 4 layer に ね, god 経 cell layer の 3 を シ ナ プ ス joint さ せ retinal を to construct す る new し い culture method を try み た. ま ず マ ウ ス origin の ES cells (EES - 6) か ら clouding culture method に よ り embryo others を し consummate, ETFs を add broth with い て, flow also train し こ れ を into yukon さ せ た. About 10 mm の big き さ に yukon っ た guy others constructs か ら eyeball primordium (retinal primordium) を be body 顕 micro microscopically に take り し, こ こ か ら retinal を constitute す る four の cells (see god 経 cell, bipolar cell layer, rods, cone cells layer, メ ラ ニ ン cells) を separation し, そ れ ぞ れ 2 times with high sexual の い cell lines を set し た. Time に 単 layer の メ ラ ニ ン cells の に large き さ の different な る コ ラ ー ゲ ン ビ ー ズ (50100200 microns) に を pay each god 経 cells with さ せ た も の を progressive heavy ね て, 4 layer structure を つ retinal others structure を cropping で き た. ロ ド プ シ ン contains cells (rods, cone cell layer) と bipolar god 経 は pigment cells in the cortex に し に with vertical column seaborne し て い る と match column by が disorderly れ て い る が by あ っ た. On the topmost layer, there are が many く of the large calythian religious cells present at <s:1> て た た. Light stimulation に よ る 発 lure 応 が confirmed answer た の の god 経 で 3 layer cells は シ ナ プ ス joint し て い る こ と が.at し た. Each layer in the omentum の different な る cell density を ビ ー ズ の big き さ の violations い で have ら れ る と exam え た が, ご く minority と は い え メ ラ ニ の ン cell layers へ の wander を stop す が る things な か っ た. During the onset of the disease, the があるためメラニ <s:1> cells in the epidiomental cavity <s:1> travel <e:1> to prevent される, <s:1>, と and われる. In the future, the raw body の retinal の よ う な き れ い な cells with column を have る た め, ビ ー ズ の form と big き さ の さ ら な る beg と 検 ビ ー ズ の の dissolving speed adjustment, さ ら に そ れ ぞ れ の cell layer を constitute す の る cell polarity を unified さ せ る new し い time が necessary で あ る.

项目成果

再生医療を目指したES細胞を細胞源とする4層構造を持つ網膜の作成

使用ES细胞作为再生医学的细胞来源创建具有四层结构的视网膜

• 发表时间: 2011
• 作者: 石川博;松永行子;大山晃弘;立花利公;中原貴;石渡勇;竹内昌治
• 通讯作者: 竹内昌治

Preparation of whole mount and thick sections for confocal maicroscopy

共焦显微镜的整体切片和厚切片的制备

• 发表时间: 2010
• 作者: Hashimoto H;Ishikawa H;Kusakabe M
• 通讯作者: Kusakabe M

ミニブタの胎仔の歯胚由来血管内皮細胞株の血管形成に関する研究

小型猪胎胚牙胚血管内皮细胞系血管生成的研究

• 发表时间: 2010
• 作者: 那須優則;中原貴;井出吉昭;富永徳子;石川博
• 通讯作者: 石川博

マウスES細胞を細胞源とする唾液腺の再生

使用小鼠 ES 细胞作为细胞来源的唾液腺再生

• 发表时间: 2011
• 作者: 川上未有希;石川博;鈴木見奈子;富永徳子;立花利公;中原貴;田中彰;又賀泉
• 通讯作者: 又賀泉

ヒト抜去歯およびその付着組織由来咸陽系幹細胞と長骨由来骨髄細胞のin vitro比較解析

人拔牙及其附着组织咸阳干细胞与长骨骨髓细胞的体外比较分析

• 发表时间: 2011
• 作者: Takahashi N;Tsunoda A;Kitamura K;田巻友一
• 通讯作者: 田巻友一