Rolle des Down-regulated in Adenoma-Proteins und des Anion Exchanger 1 in der Regulation des CI/HCO3- und des CI/OH-Austausches

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Zwei separate Ionen-Austauschprozesse, Na+/H+ und CI/HCO3, die durch den intrazellulären pH indirekt miteinander gekoppelt sind, sind hauptverantwortlich für die Resorption von Elektrolyten und Wasser im Ileum und Kolon. Während die den Na+/H+Austausch im Kolon vermittelnden Transportproteine bekannt sind, ist das für den CI/HCO3-Austausch verantwortliche Protein noch nicht identifiziert. Mögliche Kandidaten sind das Down-regulated in Adenoma-Protein (DRA), welches bei der kongenitalen Chloriddiarrhö (CLD), bei der eine Störung des CI/HCO3-Austausches im Ileum und Kolon vorliegt, mutiert ist, sowie der Anion-Exchanger 1 (AE1). Erst kürzlich wurde von Rajendran et al. (2000) die Hypothese aufgestellt, dass DRA für den CI/OH- und AE1 den CI/HCO3-Austausch im distalen Rattenkolon verantwortlich ist. Im Rahmen dieses Projektes soll diese Hypothese nun genauer untersucht werden, indem die cDNAs, die für den RattenDRA (rDRA) und den Ratten-AE1 (rAE1) kodieren, und erst kürzlich von der Arbeitsgruppe von Henry J.Binder kloniert und publiziert wurden, stabil in eine geeignete Zelllinie transfiziert werden und die Charakteristiken des CI/OH- und CI/HCO3Austausches funktionell untersucht werden. Eine zweite und auch kritische Frage ist, ob DRA neben der Regulation des CI/OH-Austausches auch die Expression von AE1-mediiertem CI/HCO3-Austausch reguliert. Zu diesem Zweck sollen zusätzlich Doppeltransfektioenen mit beiden intakten cDNAs, rDRA und rAE1, sowie, um den Gendefekt bei CLD zu simulieren, mit einer durch gezielte Mutation veränderten rDRA-cDNA durchgeführt werden.