植物の金属輸送に関与するトランスポーターの同定

1.オオムギにおいて鉄欠乏によって誘導される二つのABCトランスポーター遺伝子(HvMRP1 and HvMRP2)の機能を解析するために、RNAi法を用いて、発現抑制株を作成した。それぞれの遺伝子について17の独立したラインを取得し、その発現レベルを定量RT-PCRで測定した。その結果、HvMRP1に関してはライン1と17、HvMRP1に関してはライン13の発現が野生型と比べ有意に低下していた。金属濃度を比較した結果、野生型とRNAiラインとの間に顕著な差が認められなかった。今後これらのラインを用いて、他の形質の変化を調べていきたい。2.OsYSL16はyellow-stripe likeファミリーに属する輸送体である。OsYSL16は主に節の飾部及び葉身の維管束に局在する。また細胞内局在を調べたところ、細胞膜に局在していた。さらに酵母では、銅―ニコチアナミン錯体の輸送活性を示した。OsYSL16遺伝子を破壊すると、古い葉の銅が増加し、新葉の銅が減少した。安定同位体65Cuを用いてラベリング実験を行った結果、古い葉から新葉への移動、止葉から種子への移動が破壊株で減少していた。これらの結果はOsYSL16が銅の鯖部の転流において重要な役割を果たしていることを示している。3.OsENA1はmajor facilitator superfamily (MFS)に属する輸送体である。OsENA1は主に根で発現し、鉄欠乏によって強く誘導された。また発現量の日周性が見られなかった。Tos-17挿入破壊株を用いて解析した結果、破壊株で亜鉛の集積が見られ、OsENA1が亜鉛の恒常性に関与している可能性があることを見出した。しかし、鉄欠乏及び十分条件下で破壊株と野生型の顕著な違いは見られなかった。今後、輸送活性の再測定などを行い、その遺伝子の機能を明らかにしたい。

1.オオムギにおいて鉄欠乏によって誘導される二つのABCトランスポーター遺伝子(HvMRP1 and HvMRP2)の機能を解析するために、RNAi法を用いて、発現抑制株を作成した。それぞれの遺伝子について17の独立したラインを取得し、その発現レベルを定量RT-PCRで測定した。その結果、HvMRP1に関してはライン1と17、HvMRP1に関してはライン13の発現が野生型と比べ有意に低下していた。金属濃度を比較した結果、野生型とRNAiラインとの間に顕著な差が認められなかった。今後これらのラインを用いて、他の形質の変化を調べていきたい。2.OsYSL16はyellow-stripe likeファミリーに属する輸送体である。OsYSL16は主に節の飾部及び葉身の維管束に局在する。また細胞内局在を調べたところ、細胞膜に局在していた。さらに酵母では、銅―ニコチアナミン錯体の輸送活性を示した。OsYSL16遺伝子を破壊すると、古い葉の銅が増加し、新葉の銅が減少した。安定同位体65Cuを用いてラベリング実験を行った結果、古い葉から新葉への移動、止葉から種子への移動が破壊株で減少していた。これらの結果はOsYSL16が銅の鯖部の転流において重要な役割を果たしていることを示している。3.OsENA1はmajor facilitator superfamily (MFS)に属する輸送体である。OsENA1は主に根で発現し、鉄欠乏によって強く誘導された。また発現量の日周性が見られなかった。Tos-17挿入破壊株を用いて解析した結果、破壊株で亜鉛の集積が見られ、OsENA1が亜鉛の恒常性に関与している可能性があることを見出した。しかし、鉄欠乏及び十分条件下で破壊株と野生型の顕著な違いは見られなかった。今後、輸送活性の再測定などを行い、その遺伝子の機能を明らかにしたい。