ウシ黄体機能の周期的変化と黄体内血管内皮分布ならびにその制御機構に関する研究

哺乳動物において排卵後に形成される黄体は、妊娠に必須の内分泌器官であり、妊娠が成立しなかった際次の発情が回帰するために黄体は退行する。申請者らはこれまでに黄体内血管内皮細胞(LEC)の細胞死が黄体退行に重要な役割を果たすこと、また、一酸化窒素(NO)がLECにおいて細胞死を誘導することを示した。黄体組織内において、NOは一般的にLECが産生すると考えられているが、ウシ顆粒層細胞においてNOが産生されることから、黄体細胞においてもNOが産生されると可能性があるが詳細は不明である。本研究では、黄体における機能調節機構の一端を調べるため、黄体細胞におけるNO産生能ならびにその調節機構を調べた。ウシ黄体細胞においてeNOSおよびiNOS mRNA発現が認められ、黄体細胞にprostaglandin F 2α (PGF ; 1μM)を添加したところ、培養上清中NO濃度が刺激された。また、黄体細胞にPGFならびにNO合成阻害剤(L-NAME)を添加したところ、NO分泌が刺激された。また、黄体細胞にPGF,L-NAME,腫瘍壊死因子(TNF ; 0.5nM)およびインターフェロンγ(IFNG ; 0.5nM)を単独または組み合わせて添加したところPGF添加区においてcontrol区と比較し細胞生存率は有意に高く、PGFおよびL-NAMEを組み合わせて添加した区ではPGF添加区と比較し細胞生存率は有意に低かった。また、サイトカインのみを添加した区と比較し、サイトカインとL-NAMEを組み合わせて添加した区において細胞生存率が有意に低かった。以上の結果より、NOは黄体細胞からも分泌されており、黄体細胞由来のNOは黄体細胞自身のP4分泌を抑制する一方で細胞生存率を高める2つの相反する作用を有することが示唆された。現在、本研究成果を生殖生理学の専門誌に投稿するため論文作成中である。

哺乳動物において排卵後に形成される黄体は、妊娠に必須の内分泌器官であり、妊娠が成立しなかった際次の発情が回帰するために黄体は退行する。申請者らはこれまでに黄体内血管内皮細胞(LEC)の細胞死が黄体退行に重要な役割を果たすこと、また、一酸化窒素(NO)がLECにおいて細胞死を誘導することを示した。黄体組織内において、NOは一般的にLECが産生すると考えられているが、ウシ顆粒層細胞においてNOが産生されることから、黄体細胞においてもNOが産生されると可能性があるが詳細は不明である。本研究では、黄体における機能調節機構の一端を調べるため、黄体細胞におけるNO産生能ならびにその調節機構を調べた。ウシ黄体細胞においてeNOSおよびiNOS mRNA発現が認められ、黄体細胞にprostaglandin F 2α (PGF ; 1μM)を添加したところ、培養上清中NO濃度が刺激された。また、黄体細胞にPGFならびにNO合成阻害剤(L-NAME)を添加したところ、NO分泌が刺激された。また、黄体細胞にPGF,L-NAME,腫瘍壊死因子(TNF ; 0.5nM)およびインターフェロンγ(IFNG ; 0.5nM)を単独または組み合わせて添加したところPGF添加区においてcontrol区と比較し細胞生存率は有意に高く、PGFおよびL-NAMEを組み合わせて添加した区ではPGF添加区と比較し細胞生存率は有意に低かった。また、サイトカインのみを添加した区と比較し、サイトカインとL-NAMEを組み合わせて添加した区において細胞生存率が有意に低かった。以上の結果より、NOは黄体細胞からも分泌されており、黄体細胞由来のNOは黄体細胞自身のP4分泌を抑制する一方で細胞生存率を高める2つの相反する作用を有することが示唆された。現在、本研究成果を生殖生理学の専門誌に投稿するため論文作成中である。