造血器におけるTET2の機能解析およびメチル化への影響の解明

1.TET2遺伝子改変マウスによる血液細胞の機能解析:(1)胎児肝細胞解析:tET2 gene trap (tET2^<GT>)マウスは,Tet2の発現が20%まで減弱したノックダウンマウスであり,5ヒドロキシメチルシトシンは野生型の半量まで減弱していた.このTet2^<gt/gt>マウスの胎児肝では,造血幹細胞を含む分画の増加を認め,継代移植にて競合的再構築能の亢進を認めた.(2)成体解析:Tet2^<gt/gt>は生後数日以内に死亡するため成体が得られないとされていたが,我々の施設では野生型に比べメンデル比の半分程度のホモ型の成体が得られた.Tet2^<gt/gt>マウスでは,60週齢未満のマウスにおいて脾腫およびCD4+/PD1+/Cxcr5+の濾胞性ヘルパーT細胞(Tfh)の増多を認めた.60週齢以上の7匹中5匹においてリンパ腫を発症した.リンパ腫細胞は免疫組織化学的にTfh細胞と同様であり,Tet2^<gt/gt>マウスではヒトにおけるPTCL,NOSに相当するリンパ腫を発症することを明らかにした.2.リンパ腫細胞における下流遺伝子の発現解析野生型とリンパ腫細胞におけるマイクロアレイの解析を行った.Gene Set Enrichment Analysisの解析結果より,Tet2^<gt/gt>マウスに生じたリンパ腫細胞は,Bc16,cMaf,PD1,Iccosなどの発現上昇を認め,Tfh細胞と似通った発現パタンをとることを明らかにした.3.リンパ腫細胞におけるエピゲノム解析Tfh細胞の重要な転写因子であるBc16はintron1のメチル化の亢進により,発現が正に制御されることが知られている.Tet2^<gt/gt>に生じたリンパ腫細胞では同部位が高メチル化状態を呈していることをMeDIPおよびバイサルファイトシークエンスで明らかにした.Tet2の機能低下がBc16の異常なメチル化を引き起こし,PTCL,NOSに相当するリンパ腫の発症に関与する可能性が考えられる.

1.TET2遺伝子改変マウスによる血液細胞の機能解析:(1)胎児肝細胞解析:tET2 gene trap (tET2^<GT>)マウスは,Tet2の発現が20%まで減弱したノックダウンマウスであり,5ヒドロキシメチルシトシンは野生型の半量まで減弱していた.このTet2^<gt/gt>マウスの胎児肝では,造血幹細胞を含む分画の増加を認め,継代移植にて競合的再構築能の亢進を認めた.(2)成体解析:Tet2^<gt/gt>は生後数日以内に死亡するため成体が得られないとされていたが,我々の施設では野生型に比べメンデル比の半分程度のホモ型の成体が得られた.Tet2^<gt/gt>マウスでは,60週齢未満のマウスにおいて脾腫およびCD4+/PD1+/Cxcr5+の濾胞性ヘルパーT細胞(Tfh)の増多を認めた.60週齢以上の7匹中5匹においてリンパ腫を発症した.リンパ腫細胞は免疫組織化学的にTfh細胞と同様であり,Tet2^<gt/gt>マウスではヒトにおけるPTCL,NOSに相当するリンパ腫を発症することを明らかにした.2.リンパ腫細胞における下流遺伝子の発現解析野生型とリンパ腫細胞におけるマイクロアレイの解析を行った.Gene Set Enrichment Analysisの解析結果より,Tet2^<gt/gt>マウスに生じたリンパ腫細胞は,Bc16,cMaf,PD1,Iccosなどの発現上昇を認め,Tfh細胞と似通った発現パタンをとることを明らかにした.3.リンパ腫細胞におけるエピゲノム解析Tfh細胞の重要な転写因子であるBc16はintron1のメチル化の亢進により,発現が正に制御されることが知られている.Tet2^<gt/gt>に生じたリンパ腫細胞では同部位が高メチル化状態を呈していることをMeDIPおよびバイサルファイトシークエンスで明らかにした.Tet2の機能低下がBc16の異常なメチル化を引き起こし,PTCL,NOSに相当するリンパ腫の発症に関与する可能性が考えられる.