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人工マイクロRNAライブラリーを用いた植物ウイルスの複製複合体の解明

使用人工 microRNA 文库阐明植物病毒复制复合物

基本信息

批准号：
11J02351
负责人：
岡野夕香里
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度も引き続き、植物ウイルスの複製に関与する宿主因子およびウイルス複製を阻害する因子を網羅的に特定するためのハイスループットな系の確立に先立ち、感染効率の高い植物ウイルスベクターの構築および最適化を行った。現在、植物ウイルスベクターとしてはpotato virus X (PVX)を利用したものが広く用いられている。しかし、PVXベクターは挿入配列の安定性に問題があり、さらにシロイヌナズナには感染できず、本研究に適さない。そこで、PVXに近縁でシロイヌナズナに感染するplantago asiatica mosaic virus (P1AMV)を利用し、ウイルスベクターを開発することとした。ウイルス複製の指標とするために、GFP遺伝子をP1AMVゲノムへと挿入した。まずはPVXベクターと同様の構築法を試したが、植物への接種の結果、ベクターからGFP遺伝子の脱落が確認された。そこで、口蹄疫ウイルスが持つ自己切断配列である2A配列を挟んで、GFPと外被タンパク質を融合タンパク質として翻訳させるなどの改変を施した。その結果、植物で安定的に目的タンパク質を発現させることができた。続いて、P1AWベクターを用いてシロイヌナズナへの接種を行ったところ、ウイルスのGFP蛍光の全身拡大が確認された。次に、このベクターをシロイヌナズナのプロトプラストへと接種したところ、ウイルスのGFP蛍光が観察できた。構築したGFP挿入P1AMV「ベクターを用いることで、植物ウイルスの複製に関与する宿主因子およびウイルス複製を阻害する因子を網羅的に特定するためのハイスループットな系を確立することが可能となった。従って、本研究の成果は、植物ウイルスの複製機構の全容解明につながる有用な知見となったと考えられる。

This year's もcitation き続き, plant ウイルスのreplication に口 and するhost factor およびウイルスreplication をblocking するfactor をnetwork にspecific するIt is a plant that has a high infection efficiency and a plant that has a high infection efficiency. Now, plant ウイルスベクターとしてはpotato virusしかし, PVX inserted into the arrangement of the stability of the problem があり, さらにシロイヌナズナには infection できず, this study is suitable for this study.そこで、PVXにNearlyでシロイヌナズナにInfectionするplantago asiatica mosaic virus (P1AMV)をutilizationし、ウイルスベクターを开発することとした. The index of the replication of ウイルスとするために, and the insertion of the GFP legacy そ子をP1AMV. The results of the PVX construction method and the test of the same construction method, the results of the inoculation of the plants, and the confirmation of the shedding of the GFP leaves were confirmed.そこで、Foot and Mouth Disease ウイルスがhold つSelf-cutting arrangement である2A arrangement を抟んで、GF Pと外为タンパク性をfused タンパク性としてturned訳させるなどの成変を时した. The fruit of the plant is stable and the quality of the plant is stable.続いて、P1AWベクターを用いてシロイヌナズナへのvaccinationをOK, OK, OK, OK. Tsunaru、このベクターをシロイヌナズナのプロトプラストへとvaccination したところ, ウイルスのGFP荍光が観看できた. Construct した GFP insert P1AMV "ベクターを Use いることで, plant ウイルスの copyに关与するHost factor およびウイルス replicate を hinder する factor を snare にspecific するためのハイスループットなをEstablishment of することがとなった、Results of this researchは、 Plant ウイルスの copy mechanism の comprehensive explanation につながる useful な知见となったと考えられる.