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人工マイクロRNAライブラリーを用いた植物ウイルスの複製複合体の解明

使用人工 microRNA 文库阐明植物病毒复制复合物

基本信息

批准号：
11J02351
负责人：
岡野夕香里
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度も引き続き、植物ウイルスの複製に関与する宿主因子およびウイルス複製を阻害する因子を網羅的に特定するためのハイスループットな系の確立に先立ち、感染効率の高い植物ウイルスベクターの構築および最適化を行った。現在、植物ウイルスベクターとしてはpotato virus X (PVX)を利用したものが広く用いられている。しかし、PVXベクターは挿入配列の安定性に問題があり、さらにシロイヌナズナには感染できず、本研究に適さない。そこで、PVXに近縁でシロイヌナズナに感染するplantago asiatica mosaic virus (P1AMV)を利用し、ウイルスベクターを開発することとした。ウイルス複製の指標とするために、GFP遺伝子をP1AMVゲノムへと挿入した。まずはPVXベクターと同様の構築法を試したが、植物への接種の結果、ベクターからGFP遺伝子の脱落が確認された。そこで、口蹄疫ウイルスが持つ自己切断配列である2A配列を挟んで、GFPと外被タンパク質を融合タンパク質として翻訳させるなどの改変を施した。その結果、植物で安定的に目的タンパク質を発現させることができた。続いて、P1AWベクターを用いてシロイヌナズナへの接種を行ったところ、ウイルスのGFP蛍光の全身拡大が確認された。次に、このベクターをシロイヌナズナのプロトプラストへと接種したところ、ウイルスのGFP蛍光が観察できた。構築したGFP挿入P1AMV「ベクターを用いることで、植物ウイルスの複製に関与する宿主因子およびウイルス複製を阻害する因子を網羅的に特定するためのハイスループットな系を確立することが可能となった。従って、本研究の成果は、植物ウイルスの複製機構の全容解明につながる有用な知見となったと考えられる。

This year, the host factors and the replication inhibition factors of the plant species were selected and the establishment of the plant species system was carried out in advance, and the infection rate was high. Now, the plant has been using potato virus X (PVX) for a long time. The stability of PVX is a key problem in this study. PVX is currently used to infect plantago asiatica mosaic virus (P1AMV). It is important to note that the GFP gene is not present in the P1AMV. In addition, the results of inoculation of plants and the shedding of GFP genes were confirmed. For example, if you want to change your position, you can change your position by changing your position. The fruit, the plant, the stability of the purpose, the quality of the development, the quality of the development, the quality of the development. P1AW is the first to be used for the identification of GFP in the whole body. Next, we will examine the GFP content of the products. Construction of GFP into P1AMV "The role of host factors in plant replication and the role of host factors in plant replication inhibition" The role of host factors in plant replication and replication inhibition " The results of this study are useful for understanding the replication mechanism of plants.