シロイヌナズナ転写制御因子 ESR1/ESR2 によるシュート再生制御機構

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本研究では、シロイヌナズナ転写制御因子ENHANCER OF SHOOT REGENERATION(ESR)1、ESR2によるシュート再生制御の分子機構解明を目的とし、当該年度は下記の実験を行った。1.pinoid(pid)変異体ではシュート再生能が低下し、pid変異体のシュート再生過程におけるESR2の発現パターンを調べたところ、シュート誘導後5日目までは野生型との間で違いは見られなかったが、5日目以降、異常を示した。このことから、PIDはシュート再生過程において茎頂メリステム発生後期に必要とされることが示唆された。この結果は2012年度に論文として発表した。2.esr1 cuc1二重変異体ではシュート再生が全く観察されなくなり、esr2 cuc1二重変異体においてもcuc1変異体よりさらなるシュート再生功率の低下が見られた。また、組織培養においてESR2を強制的に発現させると、シュート再成功率が飛躍的に上昇するのに対して、cuc1変異体背景でESR2を強制発現させてもシュート再成功率の上昇は見られなかった。これらの結果から、シュート再生過程におけるCUC1、をESR1、ESR2の機能は関連しており、特にCUC1はESR2の下流で機能していることが推測された。3.強制発現させたときにESR1・ESR2の発現を誘導する遺伝子の機能的スクリーニングを行うためにこれまで使用していたレポーターを蛍光タンパク質からルシフェラーゼに替えた形質転換体を作出した。これにより、従来では困難であった高感度、且つ、大規模なスクリーニングが可能になることが期待される。4.酵母Two-Hybridシステムの応用系であるSplit Trpを用いて、ESR1と相互作用するタンパク質を探索するために、cDNAライブラリーベクターを構築した。現在、酵母にbaitベクターと共に導入し、相互作用因子の探索を行っている。