アトピー性皮膚炎のバリア機能破綻に関わるタンパク質群の網羅的な同定・相対定量解析

特应性皮炎屏障功能障碍相关蛋白组的综合鉴定和相对定量分析

• 批准号: 25870453
• 负责人: 高橋 仁
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25870453/
• 关键词: アトピー性皮膚炎; Proteomics

アトピー性皮膚炎は、病変部の紅斑や丘疹、痂皮と掻痒が特徴の皮膚疾患である。本疾患の病態には様々な細胞間接着因子やサイトカイン、ケモカイン、プロテアーゼが関わると考えられているが、その詳細な分子機序は不明な点が多い。本研究は、角層タンパク質の発現異常を質量分析法を用いて網羅的に解析し、角層バリア異常に関わる原因タンパク質、および、病勢を反映する分子を明らかにすることを目的とした。平成27年度は、質量分析法による角層タンパク質の同定数を改善するため、テープストリッピング法で採取した角層からのタンパク質抽出法、および、抽出したタンパク質由来のペプチドの分画法を検討した。さらに、これらの方法を用いて、患者病変部角層と健常人角層を用いた相対定量解析を行った。その結果、角層タンパク質の抽出方法は、界面活性剤を用いる方法が適し、ペプチドの分画法は、逆相HPLC法が適していることが明らかとなった。上記のタンパク質抽出法、および、HPLC分画法を用いて、患者病変部角層および健常人角層を用いた相対定量解析を行った結果、2385個のタンパク質が同定できた。現在、解析中であるため、最終的な結果ではないが、同定したタンパク質のうち、約700個のタンパク質が有意な発現差を示した。これらのタンパク質のいずれかが目的のタンパク質の可能性がある。平成25年度から平成26年度に実施した解析では、同定したタンパク質数は191個であったことから、本年度明らかにしたタンパク質抽出条件およびペプチド分画法は、角層タンパク質の解析に適していると考えられた。現在、より詳細な解析を行い、同定したタンパク質の信頼性、および、病勢との関連を検証している。その後、候補タンパク質に対する免疫学的手法を用いた検証を行うことで、アトピー性皮膚炎の病変部角層において病態の形成に関与するタンパク質が検討できるものと期待される。

特应性皮炎是一种皮肤疾病，其特征是病变处的红斑，丘疹，外壳和瘙痒。人们认为，各种细胞 - 细胞粘附因子，细胞因子，趋化因子和蛋白酶都参与了该疾病的病理，但是这些疾病的详细分子机制尚不清楚。这项研究旨在使用质谱法全面地分析角膜蛋白的异常表达，并阐明参与角膜屏障层异常和反映疾病状态的分子的致病蛋白。在2015年，为了通过质谱法改善角膜蛋白的鉴定次数，我们研究了通过胶带剥离和源自提取蛋白的肽分馏收集的角质层的蛋白质提取。此外，这些方法用于使用患者病变中的角质层和健康人的角膜层进行相对定量分析。结果，已经揭示了一种使用表面活性剂提取角膜蛋白的方法是合适的，并且相反的相HPLC方法适用于肽分馏方法。上述蛋白提取方法和HPLC分级方法用于使用患者病变中的角膜层和健康人体中的角质层进行相对定量分析，并鉴定了2,385蛋白。尽管不是最终结果，但已确定的蛋白质的最终结果表现出显着的差异表达。这些蛋白质之一可能是感兴趣的蛋白质。在2013年至2014年之间进行的分析表明，蛋白质的数量为191，因此蛋白质提取条件和肽分馏方法今年被认为适合分析角质蛋白质蛋白。当前，正在进行更详细的分析，以验证已鉴定蛋白的可靠性及其与疾病状况的关联。可以预期，通过使用免疫学技术进行候选蛋白质进​​行验证，可以研究参与特应性皮炎中角质层病理生理形成的蛋白质。