アトピー性皮膚炎のバリア機能破綻に関わるタンパク質群の網羅的な同定・相対定量解析

特应性皮炎屏障功能障碍相关蛋白组的综合鉴定和相对定量分析

• 批准号: 25870453
• 负责人: 高橋 仁
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25870453/
• 关键词: アトピー性皮膚炎; Proteomics

アトピー性皮膚炎は、病変部の紅斑や丘疹、痂皮と掻痒が特徴の皮膚疾患である。本疾患の病態には様々な細胞間接着因子やサイトカイン、ケモカイン、プロテアーゼが関わると考えられているが、その詳細な分子機序は不明な点が多い。本研究は、角層タンパク質の発現異常を質量分析法を用いて網羅的に解析し、角層バリア異常に関わる原因タンパク質、および、病勢を反映する分子を明らかにすることを目的とした。平成27年度は、質量分析法による角層タンパク質の同定数を改善するため、テープストリッピング法で採取した角層からのタンパク質抽出法、および、抽出したタンパク質由来のペプチドの分画法を検討した。さらに、これらの方法を用いて、患者病変部角層と健常人角層を用いた相対定量解析を行った。その結果、角層タンパク質の抽出方法は、界面活性剤を用いる方法が適し、ペプチドの分画法は、逆相HPLC法が適していることが明らかとなった。上記のタンパク質抽出法、および、HPLC分画法を用いて、患者病変部角層および健常人角層を用いた相対定量解析を行った結果、2385個のタンパク質が同定できた。現在、解析中であるため、最終的な結果ではないが、同定したタンパク質のうち、約700個のタンパク質が有意な発現差を示した。これらのタンパク質のいずれかが目的のタンパク質の可能性がある。平成25年度から平成26年度に実施した解析では、同定したタンパク質数は191個であったことから、本年度明らかにしたタンパク質抽出条件およびペプチド分画法は、角層タンパク質の解析に適していると考えられた。現在、より詳細な解析を行い、同定したタンパク質の信頼性、および、病勢との関連を検証している。その後、候補タンパク質に対する免疫学的手法を用いた検証を行うことで、アトピー性皮膚炎の病変部角層において病態の形成に関与するタンパク質が検討できるものと期待される。

Skin disease characterized by erythema, pimples, scab and itching. The pathological changes of this disease include intercellular adhesion factors such as protein, protein and protein. In this study, the quality analysis method for the occurrence of corner layer abnormalities was used to analyze the causes of corner layer abnormalities, and the molecular parameters for the occurrence of corner layer abnormalities were analyzed. In 2007, the quality analysis method was used to improve the quality of the corner layer. In addition, the method of quantitative analysis is applied to the patient's angle layer and the healthy angle layer. The results show that the extraction method of the angle layer is suitable for the separation method of the active agent, and the reverse phase HPLC method is suitable for the separation method. In the above note, 2385 samples were analyzed quantitatively by HPLC and mass extraction method. Now, in the analysis, the final result is the same, about 700 pieces of quality are intentionally found The probability of the target's quality is very high. In 2015, the number of prime numbers was 191. Now, the detailed analysis, the same determination, the quality of the information, the relationship between the disease and the evidence The method of immunology for the treatment of dermatitis is to examine the relationship between the disease formation and the quality of dermatitis.