权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

24S-hydroxycholesterolによる神経細胞障害メカニズムの解析

24S-羟基胆固醇引起神经元损伤的机制分析

基本信息

批准号：
12J03567
负责人：
山中一哲
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Doshisha University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J03567/
关键词：
24S-OHC Necroptosis Caspase-8 Lipid droplet ACAT エステル化脂肪酸 RIP1のリン酸化

项目摘要

以前の研究から, 神経細胞のモデルであるSH-SY5Y細胞やラット胎仔脳由来初代神経細胞において24S-hydroxycholesterol (24S-OHC)がNecroptosisを誘導し, ヒト白血病Tリンパ腫であるJurkat細胞においてはアポトーシスを誘導することが明らかになっている. これはアポトーシスとNecroptosisとのスイッチングにおいて重要なCaspase-8の発現量が, SH-SY5Y細胞や初代神経細胞において著しく低いためであると考えられた. Caspse-8の活性と24S-OHC誘導性細胞死の細胞死形態との関連を検討するため, 全Caspase阻害剤であるZVADやCaspase-8を機能欠損させたJurkat細胞であるI9.2細胞を用いて解析を行った. その結果, SH-SY5Y細胞と同様にNecroptosisが誘導されることが明らかとなり, 24S-OHC誘導性細胞死の細胞死形態の決定にはCaspase-8が重要であることが明らかとなった. また, SH-SY5Y細胞およびJurkat細胞において, 24S-OHCのエステル化およびそのエステル体の蓄積が細胞死に重要であることがACAT阻害剤を用いた研究から明らかになっている. そこで, エステル体形成に重要な脂肪酸について, さらなる解明を試みた. HPLCを用いて24S-OHC処理細胞特異的なピークを分取しGC-MSを用いて解析を行ったところ, 複数種類の24S-OHCのエステル体が存在することが示唆された. そこで, 24S-OHCとさまざまな脂肪酸を同時に添加し, 細胞死に対する影響を検討した. その結果, 不飽和脂肪酸が細胞死を増強する傾向にあることが示唆された. さらにPhospholipase A2の阻害剤によっても24S-OHC誘導性細胞死が増強されることが示唆された. ACAT1によるエステル化が誘導する細胞死は24S-OHCに特異的であるか確認するため, 種々のコレステロール酸化物に関して, 24S-OHCと同様の解析を行った. その結果, Necroptosisの誘導やLipid droplet様の構造物の形成, ACAT1阻害剤による細胞死の抑制, エステル体の蓄積は, 他のコレステロール酸化物では認められず, 24S-OHCに特異的であることが明らかとなった.

Previous studies have shown that 24S-hydroxycholesterol (24S-OHC) induces Necroptosis in primary neurons, and leukemia T cells induce Necroptosis in Jurkat cells. The expression of Caspase-8 in SH-SY5Y cells was significantly lower than that in normal cells. Caspase-8 activity and 24S-OHC induced cell death and cell death morphology were discussed in Jurkat cells. As a result, Caspase-8 plays an important role in the induction of Necroptosis in SH-SY5Y cells and in the determination of cell death morphology induced by 24S-OHC. SH-SY-5Y cells and Jurkat cells are important for the accumulation of ACAT inhibitors in SH-SY-5Y cells and Jurkat cells. Fatty acids are important for the formation of fatty acids. HPLC was used to analyze cell-specific 24S-OHC molecules and GC-MS was used to analyze them, indicating the existence of multiple 24S-OHC molecules. The effects of 24S-OHC on cell death were investigated by simultaneous addition of fatty acids. As a result, unsaturated fatty acids tend to increase in cell death. The inhibition of Phospholipase A2 by 24S-OHC-induced cell death was observed. ACAT1 is the first step in inducing cell death by 24S-OHC. As a result, Necroptosis was induced and Lipid droplet structures were formed, ACAT1 inhibitors inhibited cell death, and the accumulation of lipid molecules was inhibited.