Strukturanalyse der stark gekrümmten Caveolenmembran. Einfluß des Caveolins und der Caveolinlipide auf die Strukturbildung

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Ziel des Projektes ist es, sowohl den Einfluß der Lipidkomponente als auch den der Proteinkomponente auf die Strukturbildung der Caveolenmembran besser zu verstehen. Neben zellbiologischen Methoden stützt sich die Analyse hauptsächlich auf die Elektronenmikroskopie, speziell die Gefrierbruchanalyse und ihre Weiterentwicklung, die Immunmarkierung am GefrierbruchReplika. Diese Methode soll genutzt werden, um die Verteilung caveolenspezifischer Lipide (Ganglioside, Sphingolipide, Ceramid) an Membranen gefriergebrochener Zellkulturzellen unter Verwendung glykolipidspezifischer Antikörper zu untersuchen. Mit dem Ziel die Membranstruktur der Caveolen und speziell die der intakten Caveolin-Hülle ultrastrukturell zu untersuchen, sollen aus Zellkulturzellen Caveolen ohne Einsatz von Detergentien schonend durch Immunpräzipitation isoliert werden. Das Protein Caveolin soll isoliert, in seiner Ultrastruktur charakterisiert und in Modellmembranvesikel mit caveolenähnlicher Lipidzusammensetzung eingebaut werden. Zusätzlich sind im Projekt Versuche zur stereoskopischen Analyse der GefrierbruchImmunmarkierung und zur Erweiterung der Methode auf nicht membrangebundene, cytoplasmatisch lokalisierte Proteine geplant.