リジン脱メチル化酵素ＫＤＭ７Ａによるｐ５３活性化機構の解明

赖氨酸脱甲基酶 KDM7A 阐明 p53 激活机制

• 批准号: 24770165
• 负责人: 米沢 理人
• 金额: $ 3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24770165/
• 关键词: 細胞生物学; 生化学; タンパク質間相互作用; 癌; 分子生物学; リジンメチル化修; アセチル化修飾; リジン脱メチル化酵素; アポトーシス; 酵素; 発現制御; シグナル伝達

平成24年度実績に記述したMCF-7細胞内におけるp53-KDM7Aの相互作用は、GE社製Donkey anti-rabbit IgG-HRP を用いて行なった結果によるものであったが、この抗体は免疫沈降に用いたanti-p53 及び anti-KDM7A (いずれも mouse IgG) にcross-reactしてしまっており、また、丁度その分子量がp53の分子量に近いことから来る解釈の誤りであることが分かった。そこで、慎重にmouse IgGにcross-reactしないことが確認されたCST社製 goat anti-rabbit IgG-HRPで同様の実験を行なったところ、内在性p53-KDM7Aの相互作用は確認できなかった。細胞内においてごくminor fractionのp53がKDM7Aと相互作用する可能性も残されたので、FLAG-KDM7Aを導入したHEK293F細胞を抗FLAG M2ゲルで精製後、FLAGペプチドで溶出し、抗p53抗体でブロットしたところ、FLAG-KDM7Aを導入していない細胞に比べ優位に、また再現性をもってp53が溶出された。以上から、細胞内においてもp53とKDM7Aが直接相互作用することが確認された。

2012年结果描述的MCF-7细胞中p53-kDM7A的相互作用是基于GE制造的驴抗兔IgG-HRP进行的结果，但是这种抗体与抗P53和抗P53和Anti-KDM7A（均为小鼠IgG）的交叉反应也是为了使其造成的误解，并在其上是一种误解。 p53的分子量。因此，我们使用CST制造的山羊抗兔IgG-HRP进行了类似的实验，该实验已仔细确认不会与小鼠IgG进行交叉反应，并且没有确认内源性P53-KDM7A的相互作用。由于细胞中p53的p53仍然有可能与KDM7A相互作用，因此用FLAG-KDM7A转染的HEK293F细胞在抗FLAG M2凝胶上纯化，用FLAG M2凝胶洗脱，用FLAG肽洗脱并用抗P53抗体染色，p53与p53相比，与p53相比，与p53相比，p53与FraveDa cybeby bical cybe flagna cybeby beald fropna nofa noffa noffa-flagny bical cyby nof flaviby bealt flagn cyby noff aft。从上面可以证实p53和kdm7a直接在细胞内相互作用。

项目成果

Regulation of p53 activity by the lysine demethylase KDM7A

赖氨酸脱甲基酶 KDM7A 对 p53 活性的调节

• 作者: Suzuki T;Ozasa H;Itoh Y;Zhan P;Sawada H;Mino K;Walport L;Ohkubo R;Kawamura A;Yonezawa M;Tsukada Y;Tumber A;Nakagawa H;Hasegawa M;Sasaki R;Mizukami T;Schofield CJ;Miyata N;米沢理人;米沢理人;Masato Yonezawa
• 通讯作者: Masato Yonezawa

The role of lysine demethylase KDM7A in DNA damage response

赖氨酸去甲基化酶KDM7A在DNA损伤反应中的作用

• 作者: Suzuki T;Ozasa H;Itoh Y;Zhan P;Sawada H;Mino K;Walport L;Ohkubo R;Kawamura A;Yonezawa M;Tsukada Y;Tumber A;Nakagawa H;Hasegawa M;Sasaki R;Mizukami T;Schofield CJ;Miyata N;米沢理人;米沢理人;Masato Yonezawa;Masato Yonezawa
• 通讯作者: Masato Yonezawa

Regulation of p53 activity by the Jumonji-C domain-containing enzyme KDM7A

含有 Jumonji-C 结构域的酶 KDM7A 对 p53 活性的调节

• 发表时间: 2012
• 作者: Suzuki T;Ozasa H;Itoh Y;Zhan P;Sawada H;Mino K;Walport L;Ohkubo R;Kawamura A;Yonezawa M;Tsukada Y;Tumber A;Nakagawa H;Hasegawa M;Sasaki R;Mizukami T;Schofield CJ;Miyata N;米沢理人
• 通讯作者: 米沢理人