Analyse des telotrophen Ovars von Tribolium durch Enhancertrap- und RNAi-Screens

Mit dem Mehlkäfer Tribolium stehne Drosophila eine weitere inseten - spezies zur verfigung, die sich gut f<e:1> r funktionelle genetische Untersuchungen eigne。Außer der Embryonalentwicklung unterscheidet sich ich Oogenese dieses Käfers fundamental von der bei Drosophila: im telotrophen Ovar von Tribolium enthalten die Follikel keine Nährzellen, stattdessen bleiben die wachsenden Oocyten durch lange "Nährstränge" mit einem syncytialen Tropharium verbunden。angelesichts der entscheidenden Rolle von Follikel- und Nährzellen beder mussterbildung in Drosophila lässt dies fundamentale Unterschiede erwarten beder Nährzell-Oocyten-Determination， der lockalisation母性rna and der mussterbildung in Follikelepitel。Eine eingehende genetische分析Eine telteltrophen Ovars的来源。〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕同时，也有方法表明Ansatz hierzu wollen的原理与rnai - screen的错误。模拟祖ähnlichen秀丽隐杆线虫的筛选zufällige Auswahl von zunächst 1000个cdna mittel - dsrna在Tribolium-Puppen细胞内的注射，在卵源性细胞内的功能。in solcher筛选表在果蝇，没有系统的RNAi夜zur verfgung - stet，夜möglich。Dabei können bei diesem筛选wegen des parents - effects zusätzlich auch zygotische Entwicklungsgene identifiziert werden， mit der Chance, Kurzkeim-spezifische Musterbildungsgene zu identifizieren。Bei Erfolg soler Screen später aufdas gesamte gengedehnt werden。Parallel dazu wollen wir die von unentwickelte Keimbahn-Transformation dazu verwenden, EnhancertrapLinien zu genereren, die GFP der Gal4 in spezifischen chen in Ovar bzw。在den folliken实验中。疫病转基因linen werden死亡分析在Tribolium wesentlich erleichtern和die gezielte fehl母系基因的表达ermöglichen。

Mit dem Mehlkäfer Tribolium steht neben Drosophila eine weitere Insekten-Spezies zur Verfügung, die sich gut für funktionelle genetische Untersuchungen eignet. Außer der Embryonalentwicklung unterscheidet sich auch die Oogenese dieses Käfers fundamental von der bei Drosophila: im telotrophen Ovar von Tribolium enthalten die Follikel keine Nährzellen, stattdessen bleiben die wachsenden Oocyten durch lange "Nährstränge" mit einem syncytialen Tropharium verbunden. Angesichts der entscheidenden Rolle von Follikel- und Nährzellen bei der Musterbildung in Drosophila lässt dies fundamentale Unterschiede erwarten bei der Nährzell-Oocyten-Determination, der Lokalisation maternaler RNAs und der Musterbildung im Follikelepitel. Eine eingehende genetische Analyse eines telotrophen Ovars ist daher von großem Interesse. Zudem ist sie eine Vorraussetzung für ein besseres Verständnis der frühen Embryonalentwicklung des Kurzkeim-Insekts Tribolium. Als methodischen Ansatz hierzu wollen wir das Prinzip eines RNAi-Screens erproben. Analog zu ähnlichen Screens in C. elegans soll dabei eine zufällige Auswahl von zunächst 1000 cDNAs mittels dsRNA-Injektion in Tribolium-Puppen auf ihre Funktion in der Oogenese untersucht werden. Ein solcher Screen ist in Drosophila, wo systemische RNAi nicht zur Verfügung steht, nicht möglich. Dabei können bei diesem Screen wegen des parentalen RNAi-Effekts zusätzlich auch zygotische Entwicklungsgene identifiziert werden, mit der Chance, Kurzkeim-spezifische Musterbildungsgene zu identifizieren. Bei Erfolg soll dieser Screen später auf das gesamte Genom ausgedehnt werden. Parallel dazu wollen wir die von uns entwickelte Keimbahn-Transformation dazu verwenden, EnhancertrapLinien zu generieren, die GFP oder Gal4 in spezifischen Mustern im Ovar bzw. in den Follikeln exprimieren. Diese transgenen Linien werden die Analyse der Oogenese in Tribolium wesentlich erleichtern und die gezielte Fehl-Expression von maternalen Genen ermöglichen.