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脱皮ホルモンの消失が休眠を誘導し耐寒性を強める分子機構－遺伝子カスケード－の解明

阐明蜕皮激素缺失诱导休眠和增强耐寒性的分子机制 - 遗传级联

基本信息

批准号：
26292179
负责人：
神村学
金额：
$ 5.99万
依托单位：
National Institute of Agrobiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-26292179/
关键词：
休眠脱皮ホルモンオオワタノメイガ

项目摘要

脱皮ホルモンの役割は、昆虫の脱皮・変態を引き起こすことだけではない。申請者は最近、脱皮ホルモン濃度を人為的に下げることにより、オオワタノメイガに幼虫休眠を誘導して、耐寒性を付与することに成功した。しかし、そのメカニズムの詳細は不明である。そこで本研究では、脱皮ホルモンの消失が休眠を誘導し耐寒性を強くする分子機構を解明することを目的として、①オオワタノメイガの休眠誘導過程で特異的に発現する遺伝子を探索した後、②遺伝子導入実験により休眠や耐寒性に実際に関与する遺伝子を同定し、さらに、③生理・生化学的解析等によりそれらの遺伝子産物の機能を明らかにする。以上の解析により、いずれの昆虫でも詳しいことが全くわかっていない休眠誘導、耐寒性獲得の遺伝子カスケードを解明することを目指す。オオワタノメイガの休眠虫、非休眠虫、および脱皮ホルモン分解酵素E22O処理により人為的に休眠を誘導した虫の脂肪体および真皮からRNAを抽出してRNA-seq解析を行い、休眠誘導過程で特異的に発現する遺伝子を探索した。その結果、非休眠虫では発現しないが、休眠虫とE22O処理虫の両方で発現する遺伝子が複数得られた。さらに、これらの遺伝子の発現をRT-PCRで調べ、休眠誘導過程で特異的に発現することを確認した。次に、オオワタノメイガを使ってこれらの遺伝子の機能解析を行うために、リポフェクションによる遺伝子発現実験の至適化を行った。その結果、若齢～中齢幼虫に緑色蛍光タンパク質発現プラスミドをリポフェクションすることにより、幼虫の全身で緑色蛍光タンパク質を発現できるようになった。現在、休眠誘導遺伝子候補の機能解析を行うため、これらの遺伝子の発現プラスミドを構築中である。

Decolonization of insects and insects The applicant has been successful in inducing larval dormancy due to the recent development of the disease.しかし、そのメカニズムの详细は不明である。In this study, the molecular mechanism of dormancy induction and cold tolerance induction was studied. The purpose of this study was to investigate the specific development of dormancy induction and to explore the genetic mechanism of dormancy induction.(3) Physiological and biochemical analysis, etc., to clarify the function of the gene product. The above analysis indicates that dormancy induction and cold tolerance acquisition are the main factors affecting the growth of insects. To explore the expression of RNA in dormant insects, non-dormant insects, dehiscent insects, and insect decomposing enzyme E22O treatment, RNA extraction, RNA-seq analysis, and specific expression of dormancy induction. The results, non-dormant insects, dormant insects and E22O-treated insects were found to be multiple. RT-PCR was used to detect and confirm the specific expression of dormancy induction. The function analysis of the gene is carried out in the following ways: the gene development is carried out in the optimal way. As a result, if the larvae are green, the green light will appear in the body. Now, the function analysis of dormancy induction gene candidate is in progress, and the generation of dormancy induction gene is in progress.