Struktur der aktiven Konformation des Arrestins

通过GPCRS对激活性视紫红质的识别、对视紫红质的命名以及对视紫红质的磷酸化作用的研究，发现了一种Zwei-Schritt-Mechanismus，即视紫红质的磷酸化作用是通过激酶和调节蛋白Arrestin与受体的结合来实现的。Arrestin-Familie umfastArrestin，dessen C-terminal trunkierte Spleißvariante p44，and zwei b-Arrestine，die mit anderen GPCR interagieren.在含有磷酸化视紫红质的溶液中，将C-末端构象抑制，使其与受体结合。p44也是一种非磷酸化的活性视紫红质。人们不知道，在两种改造中，一种不活化的和一种活化的Arrestin和p44在拉格ist中死亡，从而使活化的GPCR结合起来。Die Kristallstrukturen von Arrestin und b-Arrestin sind gelöst，und es wird allgemein angenommen，dass alle bislang bekannten Strukturen die inaktive Konformation repräsentieren. Antrag希望通过蛋白质工程的方法，使激活构象的稳定性得到进一步的提高。这一工作也是基于p44或Arrestin的复合物中的光致视紫红质的结构变化。

Die Deaktivierung von licht-aktiviertem Rhodopsin, dem Sehpigment und Namensgeber der Klasse der Rhodopsin-ähnlichen GPCRS, erfolgt über einen Zwei-Schritt-Mechanismus, der die Phosphorylierung des Rhodopsins durch seine Kinase und anschließende Bindung des regulatorischen Proteins Arrestin an den Rezeptor beinhaltet. Die Arrestin-Familie umfasst Arrestin, dessen C-terminal trunkierte Spleißvariante p44, und zwei b-Arrestine, die mit anderen GPCRs interagieren. Arrestin ändert die Konformation seines C-Terminus beim Kontakt mit licht-aktiviertem phosphoryliertem Rhodopsin, um selektiv diese Rezeptorform binden zu können. Im Gegensatz dazu bindet p44 auch an nicht-phosphoryliertes aktiviertes Rhodopsin. Man nimmt an, dass Arrestin und p44 in zwei Konformationen existieren, einer inaktiven und einer aktiven, die in der Lage ist, den aktivierten GPCR zu binden. Die Kristallstrukturen von Arrestin und b-Arrestin sind gelöst, und es wird allgemein angenommen, dass alle bislang bekannten Strukturen die inaktive Konformation repräsentieren. In diesem Antrag wollen wir die Struktur des visuellen Arrestins in der aktiven Konformation lösen, indem wir Protein Engineering einsetzen und verschiedene Ansätze zur Stabilisierung der aktiven Konformation während der Kristallisation verfolgen. Diese Arbeit soll auch die Basis darstellen für nachfolgende Strukturuntersuchungen des lichtaktivierten Rhodopsins im Komplex mit p44 oder Arrestin.