ブタ幹細胞と初期化関連因子を用いたクローニングの効率化に関する研究

猪干细胞高效克隆及重编程相关因子研究

• 批准号: 14F04086
• 负责人: 加藤 容子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14F04086/
• 关键词: 体細胞核移植; ブタ; 初期化; PHA; 核移植; 幹細胞; 体外培養; クローン

ブタではヒトの臓器移植を目指した研究が多く、現在では畜産分野への貢献を目指した体細胞核移植研究は少ない。そのため、ウシやマウスとは異なり、核移植のドナーとして用いる細胞の種類と核移植卵の発生能とを結びつける系統立てた情報は少ない。そこで、本研究では、ブタで様々な組織から細胞を採取し適切な培養法を検討し、それらを用いて核移植を行い、発生能を検討する。これらの知見を得て、最終目的としてブタ体細胞核移植実験系の改善を目指す。H27年度に、海外特別研究員は、本人にとって全く新しい技術である、哺乳動物卵子・初期胚の取り扱い、体外成熟培養、単為発生、核移植、リアルタイムPCRによる遺伝子発現の検討などを順調に習得したので、H2７年度はブタ体細胞核移植の体外発生能向上を目指した研究を実施した。すなわち、体細胞核移植卵の活性化方法の検討、ドナー細胞核の除核レシピエント卵への導入方法の検討、ドナー細胞種の影響；特に幹細胞の有用性の検討、培養方法を検討した。その結果、活性化方法、ドナー核の導入方法では、検討したいずれの方法でも、胚盤胞への発生率、胚盤胞の細胞数に大差はみられなかった。また、ドナー細胞としてブタiPS細胞を用いても、体外発生能や細胞数は、体細胞を用いた場合と比較して大差が見られなかったことから、幹細胞であっても卵子細胞質内で生じる初期化が強く促進されるわけではないと示唆された。培養培地にPHAを添加したところ、体外発生率が増加する傾向がみられた。

The research on somatic cell nuclear transplantation has been increasing, but the contribution of animal husbandry to somatic cell nuclear transplantation is decreasing. For example, if the cell type is different from the cell type, the cell type is different from the cell type, and the cell type is different from the cell type, the cell type is different from the cell type. In this study, we investigated the use of appropriate culture methods for tissue culture, nuclear transplantation, and biogenesis. The goal of this study is to improve the somatic cell nuclear transfer system. In H27, the overseas special researcher conducted research on the development of new technologies, mammalian egg and early embryo harvesting, in vitro maturation culture, single cell development, nuclear transfer, gene development in vitro PCR, and in vitro development of somatic cell nuclear transfer. This paper discusses the activation method of somatic cell nuclear transfer, the introduction method of somatic cell nucleus, the influence of somatic cell species, especially the usefulness of stem cells and the culture method. The results, activation methods, and methods of nuclear introduction vary greatly from one method to another, including blastoderm cell growth rate and blastoderm cell count. The number of stem cells and somatic cells used in vitro is significantly different from that of cells used in vitro. The number of stem cells and somatic cells used in vitro is significantly different from that of somatic cells. The number of stem cells used in vitro is significantly different from that of somatic cells. The growth rate of PHA in culture tends to increase.

项目成果

Evaluation of the impact of pre-exposure to PHA on developmental efficiency of porcine SCNT embryos

评估预暴露于PHA对猪SCNT胚胎发育效率的影响

• 发表时间: 2016
• 作者: May Sann Aung;Hiroshi Masuda;Takanori Kobayashi;Hiromi Nakanishi;Takashi Yamakawa;Naoko K. Nishizawa.;Ndubuisi Samuel MACHEBE et al(計８名）
• 通讯作者: Ndubuisi Samuel MACHEBE et al(計８名）

Development of porcine cloned embryos produced using fibroblast and porcine induced pluripotent stem cells as nuclei donor cell types

使用成纤维细胞和猪诱导多能干细胞作为核供体细胞类型产生猪克隆胚胎的发育

• 发表时间: 2016
• 作者: May Sann Aung;Hiroshi Masuda;Takanori Kobayashi;Hiromi Nakanishi;Takashi Yamakawa;Naoko K. Nishizawa.;Ndubuisi Samuel MACHEBE et al(計８名）;Ndubuisi Samuel Machebe et al（計９名）
• 通讯作者: Ndubuisi Samuel Machebe et al（計９名）