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新規アッセイ系を用いた卵子のトランスクリプトーム解析

使用新的检测系统进行卵母细胞转录组分析

基本信息

批准号：
22K06056
负责人：
加藤容子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kindai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

研究代表者者らは、ブタ卵を保存する新たな手法として「低温感作に関わらない培養温度域で保存する」という手法を開発した。ブタ卵は低温に対する感受性が高く、他の動物種で実施されている低温保存法があまり適切でないためである。既に生物学的な検討として、保存後、核のある状態の卵を用いた単為発生と卵の核を除去して体細胞核を導入して作出した（保存卵は細胞質のみ）核移植を実施し、それぞれの体外発生能を支持できる保存時間が異なることを明らかにしてきた。本課題では、この保存系をツールとして使用して、体外培養時に生じる卵細胞質の老化を阻止する因子や体細胞核を初期化する因子を大規模トランスクリプトームにより明らかにすることができるのではないかと考えた。R４年度は、保存卵におけるROS、GSH、ミトコンドリア膜電位などといったいくつかの生化学的特性を検討し生物学的検討の結果と照合した。その結果、２４時間保存までは、対照区と比較してそれらの数値が大きくは変化しないことがわかった。また、保存培地に抗酸化物質を添加したり、保存前に卵をシクロスポリン（Cs）A で前処置することによって、若干、生化学的特性評価に用いた指標の値を改善する働きのあることもわかった。また保存２７時間を超えると徐々に変化が起き始めることもわかった。この結果は生物学的検討の結果と同じ傾向であることがわかった。このような結果から、遺伝子発現の差異を比較検討するのに適切と考えられる時間帯域を決定できた。そして、現在はそれらの時間帯の卵を回収し始めている。

The researchers proposed a new method for the preservation of eggs, namely,"low temperature induction, culture temperature and preservation." Cryopreservation of eggs is highly sensitive to low temperatures and appropriate for other animal species. Biological studies, preservation, nuclear state, egg use, egg development, egg nuclear removal, somatic cell nuclear transfer, egg preservation, and in vitro energy support vary in preservation time. The subject of this study is to investigate the use of these preservation systems in vitro to prevent the aging of egg cytoplasm and somatic cell nuclei on a large scale. In R4, the biochemical characteristics of ROS, GSH and GSH in preserved eggs were investigated and the results of biological investigation were compared. The result of the 24-hour preservation is that the number of pairs. Add anti-acidification substances to the culture medium before preservation, and improve the quality of the medium before disposal. 27 hours later, he was killed. The result of this biological study is the same as the result of the study. The difference between the result and the occurrence of the gene is discussed and the time domain is determined. The time has come for us to return to the past.