細胞核の初期化に関する研究

细胞核重编程研究

• 批准号: 14034259
• 负责人: 加藤 容子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14034259/
• 关键词: 核移植; 初期化因子; 体細胞クローン; 応用動物; 発生分化; バイオテクノロジー; 初期化; 卵子

本研究では,体細胞核移植をより確実な技術にすること,また,核移植を介さない細胞の初期化法を確立することを最終目的として実施した。すなわち,卵子に含まれる初期化因子の実体を探るとともに,初期割球や培養細胞を様々な角度から受精卵に近付ける工夫を行なった。また,現在の体細胞核移植法では,クローン胚の発生率が低く,高頻度で死亡することから,正常に発生するための工夫を行なった。本年度は以下の実験を行なった。ウシMII期末受精卵に電気刺激による活性化刺激を付与し,電気刺激を与えていない卵子と与えた卵子との間で,予備的に2次元電気泳動をおこない,タンパクレベルでの差異がみられるかどうかを条件設定した。その結果,20個の卵子を用いて,差異のあるスポットを検出することができた。マウスMII期の卵子の回収率の高いタンパク採取法について検討した100個のMII期卵子の透明帯を除去し,その後,(1)界面活性剤や還元剤を含まないバッファ,(2)界面活性剤や還元剤を含むバッファ,(3)より強力な界面活性剤や還元剤を含むバッファで可溶化した上清を2次元電気泳動に供した。その結果,(1)界面活性剤や還元剤を含まないバッファで処理した場合に解析可能なスポットを複数見つけることができた。現在は,ウシとマウスの卵子を用い,活性化を付与したものと付与しないものとの間におけるタンパクレベルの差異をより詳細に検討中である。

The aim of this study is to establish the initial method of somatic cell nuclear transplantation. The egg contains the initial factors and the embryo is cultured in vitro. The current somatic cell nuclear transfer method has a low embryo birth rate, a high death rate, and a normal embryo birth time. The following results were achieved this year. The activation of the electrical stimulation of the fertilized egg at the end of the MII period is applied. The electrical stimulation is applied to the egg and the egg. The prepared two-dimensional electrical migration is different. 20 eggs were used, and the difference was not significant. The recovery rate of MII eggs was higher than that of 100 MII eggs. After the transparent zone was removed,(1) the surfactant and the reducing agent were included,(2) the surfactant and the reducing agent were included,(3) the surfactant and the reducing agent were included, and (2) the electrolyte was provided. The results are as follows: (1) The interfacial activity of the surfactant is determined by the number of possible solutions. Now, it's time for the egg to be used, and the activation is given to the egg.

项目成果

T.Tani, Y.Kato, Y.Tsunoda: "Preprogramming of bovine somatic cell nuclei is not directly regulated by maturation promoting factor or mitogen-activated protein kinase activity"Biology of Reproduction. 69. 1890-1894 (2003)

T.Tani、Y.Kato、Y.Tsunoda：“牛体细胞核的预编程不直接受成熟促进因子或丝裂原激活蛋白激酶活性的调节”《生殖生物学》。

Yin, XI., Kato, Y., Tsunoda, Y: "Effect of enucleation procedures and maturation conditions on the development of nuclear-transferred rabbit oocytes receiving male fibroblast cells"Reproduction. 124. 41-47 (2002)

Yin，XI.，Kato，Y.，Tsunoda，Y：“去核程序和成熟条件对接受雄性成纤维细胞的核移植兔卵母细胞发育的影响”复制。

Kato, Imabayashi, Mori, Tani, Taniguchi, Higashi, Matsunoto, Umezawa, Tsunoda: "Nuclear transfer of adult bone marrow mesenchymal stem cells : developmental totipo tency"Biology of Reproduction. 70. 415-418 (2004)

Kato、Imabayashi、Mori、Tani、Taniguchi、Higashi、Matsunoto、Umezawa、Tsunoda：“成体骨髓间充质干细胞的核转移：发育性 totipo 倾向”生殖生物学。

M.Kawakami, Tani, T, Yabuuchi, A, Kobayashi, T, Murakami, H, Fujimura, Y, Kato, Y.Tsun: "Effect of demecolcine and nocodazole on efficiency of chemically assisted removal"Cloning and Stem Cells. 5. 379-387 (2003)

M.Kawakami, Tani, T, Yabuuchi, A, Kobayashi, T, Murakami, H, Fujimura, Y, Kato, Y.Tsun：“德美考辛和诺考达唑对化学辅助去除效率的影响”克隆和干细胞。

T.Kobayashi, Y.Kato, Y.Tsunoda: "Effect of the timing of the first cleavage on the developmental potential of nuclear-transferred mouse oocytes receiving embryonic stem cells"Theriogenology. (In press). (2004)

T.Kobayashi、Y.Kato、Y.Tsunoda：“第一次卵裂时间对接受胚胎干细胞的核移植小鼠卵母细胞发育潜力的影响”动物发生学。