細胞増殖に関わる細菌型ｍｉｔｏＮＥＥＴの生体内レドックス制御システムの網羅的解析

全面分析细菌mitoNEET参与细胞增殖的体内氧化还原控制系统

• 批准号: 14F04415
• 负责人: 岩崎 俊雄
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14F04415/
• 关键词: mitoNEET; 構造機能; レドックス; プロテオーム; 鉄硫黄クラスター; 構造生物学; 機能、生理学; 細菌; 外国人特別研究員

高度好熱菌Thermus thermophilus HB8より見出した好熱菌mitoNEETホモログ（TthNEET）は、特異な[2Fe-2S](His)1(Cys)3クラスターをもつ。TthNEETの「レドックス制御機構」を調べるため、鉄硫黄クラスター近傍に位置し、酸化還元電位に影響する保存性残基に着目し、それらの変異酵素等の結晶構造解析（構造精密化）を行った。これらの変異酵素の相同置換株を作成したところ、当初の予想に反して、いずれもTthNEET欠損株が示す「グルコース感受性生育阻害」を相補したことから、少なくともこの表現型については、TthNEET鉄硫黄クラスター中心のレドックス反応とは直接相関しないことが示唆されている。構造解析の結果、変異導入による構造変化は非常に局所的であり、全体構造にはほとんど影響がないことを確認した。これは変異酵素導入株における表現型解析の結果と矛盾しない。TthNEETにつきpulldown assayを検討したが、相互作用が弱いためか実験条件設定の問題かは不明だが、有為なパートナー酵素を同定することはできなかった。そこで野生株とTthNEET欠損株につき、二次元電気泳動と質量分析によるプロテオーム解析を行い、有為な変化を検出・同定できた。その他、TthNEETにつき、詳細な物理化学解析とシミュレーション解析を行い、国際学会等で成果発表した。今後はより精密な解析を行い、TthNEETの生理機能の解明に繋げたいと考えている。

Thermus thermophilus HB8 [2Fe-2S](His)1(Cys)3 The crystal structure analysis (structure refinement) of TthNEET is carried out by adjusting the position of iron and sulfur in the vicinity, affecting the potential of acidification, and preserving residues. The phenotype of these different enzymes is directly related to the production of the same mutant strain. The result of structural analysis, different introduction, structural transformation, special situation, overall structural transformation, influence and confirmation The results of phenotypic analysis of the allozyme introduced strains were contradictory. TthNEET is a pulldown assay. It's a weak interaction. It's a condition setting problem. It's an enzyme setting problem. Wild plants, TthNEET, deficient plants, quadratic electrokinetic analysis, qualitative analysis The results of other, TthNEET, detailed physical and chemical analysis, international society, etc. were presented. In the future, we will analyze the physiological function of TthNEET accurately and explain it carefully.

项目成果

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Exploring the through-bond outer-sphere interactions in biological [2Fe-2S] proteins by two-dimensional 13Cbeta(cysteine) pulsed EPR

通过二维 13Cbeta（半胱氨酸）脉冲 EPR 探索生物 [2Fe-2S] 蛋白质中的通过键外球相互作用

• 发表时间: 2016
• 作者: Taguchi;A. T.;Dikanov;S. A.;and Iwasaki;T.
• 通讯作者: T.

Mapping the electron spin distribution in [2Fe-2S] proteins by 13C(beta) cysteine labeling: implications in electron transport pathways

通过 13C(β) 半胱氨酸标记绘制 [2Fe-2S] 蛋白质中的电子自旋分布：对电子传输途径的影响

• 发表时间: 2015
• 作者: Taguchi;A. T.;Miyajima-Nakano;Y.;Fukazawa;R.;Baldansuren;A.;Samoilova;R. I.;Hasegawa;K.;Kumasaka;T.;Dikanov;S. A.;and Iwasaki;T.
• 通讯作者: T.