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次世代型バイオ医薬品のための選択的分子導入システムの開発

开发下一代生物制药的选择性分子导入系统

基本信息

批准号：
14J01383
负责人：
飯盛遊
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は主に以下の3点について評価した。まずイオン交換基の種類がタンパク質の吸着配向性へ及ぼす影響について調査した。具体的には両性イオン交換担体であるハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー(HAC)における固相反応、pH勾配クロマトグラフィーによる吸着配向性の評価を実施した。その結果、HACでは標準的なイオン交換クロマトグラフィー(IEC)に比べて数・位置異性体の選択性は低下した。そこで機構モデルにより吸着サイト数B値を評価したところ、IECと比較しHACではB値が1減少した。上述の知見はIECではリゾチーム表層上のK33(アミノ酸配列における33番目のリジン残基)がカラム吸着に使用されるが、HACではK33がPEG修飾可能な位置に存在することを示唆している。次にタンパク質の吸着密度が収率に及ぼす影響について評価した。具体的には移動相塩濃度により吸着密度を変化させ固相反応を実施し、基材とPEG鎖の親和性が収率に影響を及ぼすことを明らかにした。また標準的なIECを用いた場合収率は3割程度にとどまっていたがHACでは収率は9割を超えた。この結果より、修飾位置の限定率に関してはIECよりも劣るものの、HACにより高効率な固相反応操作を確立できると考えられる。さらに拡散係数、分配係数を用いて機構モデルに従いPEG化タンパク質溶出曲線・分離度の流速依存性をシミュレーションした。その結果、溶出曲線を正確に予測できること、PEG化タンパク質を多孔性微粒子型クロマトグラフィーにて分離する際には流速を増加させると分離度が著しく低下することが明示された。加えてモノリスクロマトグラフィーを用いてPEG化タンパク質の分離条件を最適化した。本手法は1測定あたり6分以内で実施できるため、製造工程のモニタリングによって品質を保証するためのシステムであるPATへの応用が期待できる。

This year, the following three points were reviewed: Investigation on the Sorption Alignment and the Effect of Different Exchange Groups Specific properties of the exchange support, such as solid phase reaction, pH coordination, adsorption and alignment evaluation As a result, the selectivity of HAC is lower than that of IEC. For example, the number of B values in the IEC is 1. The above findings indicate the use of K33(a residue in the 33-position amino acid sequence) on the surface layer of IEC and the presence of K33 as a possible PEG modification site in HAC. Second, the adsorption density of the substance and the effect of the adsorption on the adsorption rate are evaluated. Specific mobile phase concentration, adsorption density, solid phase reaction, substrate, PEG lock affinity, and reaction rate The IEC standard is used in case the rate is 3%. The HAC rate is 9%. The result is that the limit ratio of the modified position is related to the IEC, the HAC and the solid phase reaction operation. In addition, dispersion coefficient, partition coefficient and flow rate dependence of PEG dissolution curve are used in the system. The results, dissolution curve accurate prediction, PEGylation, porous particle type, separation, flow rate increase, resolution increase, low. To optimize the separation conditions of PEGs This method can be used to ensure the quality of production engineering within 6 minutes.