Einfluss einer Probiotika-Fütterung auf das Expressions-Profil porciner Darm-Epithelzellen in vivo

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Mittels molekularer Transkript-Analysen sollen spezifische Reaktionen der Darm-Epithelzellen und der Lymphozyten bei Ferkeln nach Applikation des Probiotikums Enterococcus faecium NCIMB 10415 charakterisiert werden. Durch die Untersuchung möglicher Modulationen des Expressions-Musters ausgewählter Proteine (Kandidatengene: Wachstumsfaktoren, Hormonrezeptoren, Extrazelluläre Matrix-Komponenten, Streß- und Oxidationsschutz-Proteine, Membran-Transporter) sollen erste Aussagen über die intestinale Wirkung des verwendeten Probiotiums ermöglicht werden. Mittels qualitativer und quantitativer RNA-Analyse-Techniken können so spezifische Expressionsmarker festgestellt werden, die eine lokale Regulation erfahren. Ein weiterer Aspekt ist die Suche nach neuen Transkripten, die in Probiotika-gefütterten Schweinen reguliert erscheinen. Dies wird durch substraktive cDNA-Klonierung von Darmepithel-Proben aus behandelten Tieren versus Proben aus der Kontrollgruppe erfolgen. Nach Erstellung einer ersten intestinalen porcinen Transkriptom-Datenbank soll ein Mikroarray-System zur komplexen Typisierung der Expression etabliert werden, um ein schnelles Screening der Transkripte aus Darmepithelzellen zu ermöglichen. Der Mikro-Array soll als schnelles Screeningverfahren innerhalb des ersten Versuches (Probiotika-Fütterung versus Kontrollgruppe) als auch beim Challenge-Versuch eingesetzt werden, um den Einfluß des Probiotikums auf Epithelzellen und bei der Immunantwort auf Keime zu untersuchen.