構造情報に基づく脂質シグナル分子の認識機構の解明

基于结构信息阐明脂质信号分子识别机制

• 批准号: 15J00102
• 负责人: 森本 和志
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J00102/
• 关键词: PLA2; プロスタグランジン; X線結晶構造解析; EP3

ホスホリパーゼA2(PLA2)はリン脂質のsn-2位の脂肪酸を切断する酵素であり、様々な脂質群を基質とすることでアラキドン酸をはじめとする様々な脂肪酸およびリゾリン脂質を遊離する。PLA2の基質特異性は比較的緩やかであり、多様な基質を受容できる結合ポケットを持つことが推測される。一方、PLA2によって産生された脂質群は代謝を受け、その一部はGタンパク質共役型受容体(GPCR)に作用することで作用を発揮する。例えばプロスタグランジン(PG)は計８種類のGPCRと結合することにより効果を発揮するが、EP受容体とDP受容体はケトン基(O)と水酸基(OH)の違いを見分けることが出来るほどその基質特異性は厳密である。PLA2については予想以上に安定性が悪く発現が困難であったことから、本年度は進捗のあったPGE受容体EP3に集中して研究を進めることとした。EP3受容体については、昨年度までに昆虫細胞5 L培養分から約3 mgの精製タンパク質を得ることに成功していた。そこで本年度は、結晶化条件の検討およびコンストラクトの最適化を行うことにより結晶の取得を目指した。GPCRの構造解析では、細胞内第3ループや細胞外N末端領域に融合タンパク質を挿入したり、立体構造認識抗体を結合させることで安定性および結晶性の向上が図られる。そこで、融合タンパク質の種類や挿入位置の最適化検討を行った。また、立体構造認識抗体を複数クローン樹立し、これらを用いた結晶化検討も平行して行った。その結果、最終的に分解能2.7 Aの回折データを得ることに成功した。

ホ ス ホ リ パ ー ゼ A2 (PLA2) は リ ン lipid の sn - two の fatty acids を cut す る enzyme で あ り, others 々 な lipid group を matrix と す る こ と で ア ラ キ ド ン acid を は じ め と す る others 々 な fatty acids お よ び リ ゾ リ ン lipid を free す る. PLA2 の substrate specificity は comparison slow や か で あ り, many others を な matrix by let で き る combining ポ ケ ッ ト を hold つ こ と が speculation さ れ る. Party, PLA2 に よ っ て produce さ れ た lipid metabolic を は け, group そ の a は G タ ン パ ク total service quality model subjected to let body (GPCR) に す る こ と で role を 発 swing す る. Example え ば プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ン (PG) は meter 8 kinds の GPCR と combining す る こ と に よ り unseen fruit を 発 swing す る が, EP by let と DP by let は ケ ト ン base と water acid radical (O) (OH) の violations い を see points け る こ と が out る ほ ど そ の substrate specificity は 厳 dense で あ る. PLA2 に つ い て は to think above に stability が 悪 く 発 が now difficult で あ っ た こ と か ら, this year's は 捗 の あ っ た PGE by let body EP3 に concentrated し を て research into め る こ と と し た. EP3 by let body に つ い て は, yesterday's annual ま で に insect cell 5 L culture points か ら about 3 mg の refined タ ン パ ク qualitative を must る こ と に successful し て い た. そ こ で は, crystallization conditions this year の beg お 検 よ び コ ン ス ト ラ ク ト の line optimization を う こ と に よ り crystallization の obtain を refers し た. GPCR の structure で は, intracellular 3 ル ー プ や に N terminal field outside the cell fusion タ ン パ ク qualitative を scions into し た り antibody を, three-dimensional structure combining さ せ る こ と で stability お よ び crystalline の upward が 図 ら れ る. Youdaoplaceholder0 検 で, fusing タ パ パ species of wood, や insertion position, <s:1> optimization, 検 and を line った. Youdaoplaceholder0, three-dimensional structure recognition antibody を complex number <s:1> ロ ロ ロ <s:1> establishment of <s:1>, <s:1> れらを crystallization using た た 検 to discuss <s:1> parallel て row った. Youdaoplaceholder0 そ result, the final に decomposition can be 2.7 A <s:1>, and the デ デ タを タを タを is that る とに とに とに is successful た た.

项目成果

IL-33誘導性マスト細胞応答におけるプロスタサイクリン受容体IPの役割

前列环素受体 IP 在 IL-33 诱导的肥大细胞反应中的作用

• 发表时间: 2013
• 作者: 鈴木佑治;渡辺真由帆;森本和志;土屋創健;成宮 周;杉本幸彦
• 通讯作者: 杉本幸彦

マスト細胞の炎症性応答に対するプロスタサイクリン受容体IPの抑制機構

前列环素受体IP对肥大细胞炎症反应的抑制机制

• 发表时间: 2017
• 作者: Liu M;Saeki K;Matsunobu T;Okuno T;Koga T;Sugimoto Y;Yokoyama C;Nakamizo S;Kabashima K;Narumiya S;Shimizu T;Yokomizo T;杉本幸彦;杉本幸彦;杉本幸彦;Yukihiko Sugimoto;Yukihiko Sugimoto;杉本幸彦;宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，村上里穂，稲住知明，土屋創健，成宮周，杉本幸彦
• 通讯作者: 宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，村上里穂，稲住知明，土屋創健，成宮周，杉本幸彦

プロスタノイドIP受容体によるマスト細胞の炎症性応答の抑制機構

前列腺素IP受体抑制肥大细胞炎症反应的机制

• 发表时间: 2016
• 作者: 宮本卓馬;鈴木佑治;渡辺真由帆;森本和志;稲住知明;土屋創健;成宮周;杉本幸彦;村上里穂，宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，稲住知明，土屋創健，成宮周，杉本幸彦;Yukihiko Sugimoto;北條寛典，吉岡美樹，平川昌樹，土屋裕義，土屋創健，三隅将吾，瀬木-西田恵里，杉本幸彦;宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，土屋創健，成宮周，杉本幸彦;宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，土屋創健，成宮周，杉本幸彦
• 通讯作者: 宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，土屋創健，成宮周，杉本幸彦

IL-33によるマスト細胞の炎症性サイトカイン産生におけるプロスタサイクリン受容体IPの役割

前列环素受体 IP 在 IL-33 肥大细胞炎症细胞因子产生中的作用

• 发表时间: 2016
• 作者: 宮本卓馬;鈴木佑治;渡辺真由帆;森本和志;稲住知明;土屋創健;成宮周;杉本幸彦
• 通讯作者: 杉本幸彦

マスト細胞の炎症性応答に対するプロスタサイクリン受容体IPの役割

前列环素受体 IP 对肥大细胞炎症反应的作用

• 发表时间: 2016
• 作者: 宮本卓馬;鈴木佑治;渡辺真由帆;森本和志;稲住知明;土屋創健;成宮周;杉本幸彦;村上里穂，宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，稲住知明，土屋創健，成宮周，杉本幸彦;Yukihiko Sugimoto;北條寛典，吉岡美樹，平川昌樹，土屋裕義，土屋創健，三隅将吾，瀬木-西田恵里，杉本幸彦;宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，土屋創健，成宮周，杉本幸彦
• 通讯作者: 宮本卓馬，鈴木佑治，渡辺真由帆，森本和志，土屋創健，成宮周，杉本幸彦