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ミトコンドリア内への過剰なＣａ２＋流入を感知・抑制する蛋白質複合体の構造生物学

感知和抑制过量 Ca2+ 流入线粒体的蛋白质复合物的结构生物学

基本信息

批准号：
15J40096
负责人：
真板綾子
金额：
$ 2.58万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-07-29 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J40096/
关键词：
蛋白質複合体 X線構造解析ミトコンドリアカルシウム X線結晶構造解析

项目摘要

所属研究室で見出されたミトコンドリアへの過剰なカルシウム取り込みの制御HAX-1-UCP3複合体に着目し、構造生物学的手法（X線回折実験・NMR法）を駆使して、この複合体の構造機能相関研究を行った。これまでに、以下のことを明らかにしてきた。①HAX-1とUCP3の相互作用領域がそれぞれC末端側領域（HAX-1(211-280)）とミトコンドリア内腔に存在するループ2領域(UCP3(165-175))であること及び両者の結合にはカルシウムの存在が必須であること。②HAX-1(211-280)に関しては、カルシウムと直接結合すること及びその結合により大きな構造変化（部分的なフォールディング）が誘起されること。③HAX-1は、カルシウムとの結合により膜結合性を獲得すること。④HAX-1のC末端側の膜結合に関わるαヘリックスを除去すると、UCP3ループ2との結合は維持されるが、カルシウムと直接結合できなくなること。これらの結果から以下の仮説を立てた。HAX-1のC末端側のαへリックス領域は、カルシウム非存在下ではアンフォールド状態をしており、UCP3のループ2領域が、HAX-1のUCP3のループ2領域との結合領域に接近するのを妨げる。一方、カルシウム存在下においてC末端側のαへリックス構造が誘起されると共に膜結合性を獲得し、UCP3ループ2領域との結合領域が露出することでUCP3との結合が可能になる。また、この複合体と相互作用する因子があるか否かをUCP3を強制発現させた筋芽細胞のミトコンドリア画分とリコンビナントHax-1(211-280)を用いて、免疫沈降実験を行った。因子の同定には至らなかったが、この複合体と結合しうる因子が存在することを明らかにした。

The research lab is responsible for the control of HAX-1-UCP3 complex by using the method of aiming at the target and creating biology (X-ray back-to-back NMR method) so that the machine can be used to study the performance of the complex. Please tell me what's going on, and the following is the following. The field of 1HAX-1 UCP3 interaction is related to the field of HAX-1 (211,280,280C). There is a significant difference between the field of UCP3 (165175) and the domain of UCP3 (165175). 2HAX-1 (211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280,211,280, The combination of 3HAX-1 and Elisa and the combination of the membrane and the membrane was proved to be effective. The C-terminal membrane of 4HAX-1 is used to remove the enzyme, the membrane of the C-terminal of UCP3 is used to maintain the performance of the membrane, and the membrane of the C-terminal of the membrane is used to remove the enzyme, and the membrane of the C-terminal is used to maintain the temperature. The results show that the following conditions are correct. The C-terminal of HAX-1 has a significant impact on the field, the number of devices in the non-presence, the status of the network, the UCP3, the UCP3, and the combination of the domain and the domain. On the one hand, in the presence of each other, the effect of the C-terminal on the bonding of the common film is very important, and the combination of the field of UCP3 is very important. The combination of the two fields shows the potential of the combination of UCP3. The interaction between the complex and the complex, the factor, the UCP3, the cell, the cell. The factor is the same as the other two, and there is a significant difference in the combination of the complex and the factor.